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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤(malignant ovarian germ cell tumor,MOGCT)是來(lái)源于胚胎性腺的惡性腫瘤,好發(fā)于兒童及青少年,患者往往有生育要求。該腫瘤手術(shù)聯(lián)合術(shù)后化療效果顯著,但化療后卵巢功能受損,嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量及生育功能。國(guó)內(nèi)外學(xué)者均致力于研究對(duì)化療所致卵巢功能損傷的保護(hù)方法,多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)GnRH類(lèi)似物對(duì)卵巢功能的保護(hù)作用效果確切,銀杏黃酮抗氧化、抑制凋亡及對(duì)化療藥物耐藥的逆轉(zhuǎn)等作用也在多個(gè)
2、實(shí)驗(yàn)中得到了驗(yàn)證,而氨磷汀作為細(xì)胞保護(hù)劑,其在放化療過(guò)程中對(duì)于多個(gè)器官均顯示保護(hù)作用,但其對(duì)卵巢的保護(hù)作用目前未見(jiàn)報(bào)道。
MOGCT的常用化療方案為BEP、EP、VIP方案,其中主要損傷卵巢功能的藥物為順鉑。
本次實(shí)驗(yàn)使用大鼠作為卵巢功能損傷的模型,探討銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林對(duì)化療所致卵巢功能損傷的保護(hù)作用。上述三種藥物在發(fā)揮卵巢功能保護(hù)作用的同時(shí),是否影響順鉑的抗腫瘤作用,也是影響其臨床應(yīng)用的一個(gè)關(guān)鍵,
3、本次實(shí)驗(yàn)使用惡性畸胎瘤細(xì)胞PA-1作為惡性生殖細(xì)胞腫瘤的代表,探討三種藥物對(duì)順鉑的抗腫瘤作用的影響。
方法:
1、順鉑所致卵巢功能損傷的大鼠模型的建立:通過(guò)大鼠E2及FSH水平的測(cè)定及卵巢卵泡計(jì)數(shù)確定造模的劑量和時(shí)間。
2、銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林對(duì)順鉑所致大鼠卵巢功能損傷的保護(hù)作用的研究:通過(guò)卵泡計(jì)數(shù)、稱量卵巢重量、TUNEL法計(jì)算凋亡指數(shù),Western-blot法檢測(cè)胞漿Cyt-c及Ap
4、af-1蛋白含量及實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)胞漿Cyt-c及Apaf-1 mRNA表達(dá)水平。
3、銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林對(duì)順鉑抑制PA-1細(xì)胞作用的影響的研究:CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,Western-blot法檢測(cè)胞漿Cyt-c及Apaf-1蛋白含量,使用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)胞漿Cyt-c及Apaf-1 mRNA及Apaf-1 mRNA表達(dá)水平。
結(jié)果:
1、各組大鼠E2及FSH水平分別為
5、:
A組E273.87±13.95 pg/ml, B組E272.03±6.74 pg/ml, C組E265.17±5.43 pg/ml,D組E243.17±6.78 pg/ml,E組E232.80±2.46 pg/ml,F組E228.60±2.78 pg/ml,G組E222.37±2.91pg/ml,與A組相比,D組、E組、F組及G組E2下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);A組FSH1.07±0.15IU/L,B組FS
6、H1.13±0.15 IU/L,C組FSH1.30±0.26 IU/L,D組FSH1.30±0.26IU/L,E組FSH2.20±0.36 IU/L,F(xiàn)組FSH3.23±0.31 IU/L,G組FSH4.13±0.40IU/L,與A組相比,E組、F組及G組FSH升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。綜合卵泡計(jì)數(shù)情況,選取E組給藥方案作為造模方案
2、給予銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林后各組大鼠卵泡計(jì)數(shù):
生理鹽
7、水組原始卵泡37.9±2.9個(gè),生長(zhǎng)卵泡24.3±1.3個(gè),成熟卵泡13.2±1.3個(gè),卵泡總數(shù)為75.4±3.1個(gè)。順鉑組原始卵泡35.2±4.0個(gè),生長(zhǎng)卵泡8.9±1.3個(gè),成熟卵泡5.5±1.1個(gè),卵泡總數(shù)為49.6±4.5個(gè),各級(jí)卵泡及卵泡總數(shù)較生理鹽水組少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+順鉑組原始卵泡39.2±2.2個(gè),生長(zhǎng)卵泡13.6±1.3個(gè),成熟卵泡9.2±1.1個(gè),卵泡總數(shù)為60.5±3.9個(gè),各級(jí)卵泡及
8、卵泡總數(shù)較生理鹽水組少,較順鉑組多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。氨磷汀+順鉑組原始卵泡36.7±2.1個(gè),生長(zhǎng)卵泡15.8±2.1個(gè),成熟卵泡11.3±2.0個(gè),卵泡總數(shù)為63.8±5.1個(gè),各級(jí)卵泡及卵泡總數(shù)較生理鹽水組少,較順鉑組多,生長(zhǎng)卵泡及成熟卵泡數(shù)量較銀杏黃酮+順鉑組多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),原始卵泡及卵泡總數(shù)與銀杏黃酮+順鉑組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。亮丙瑞林+順鉑組原始卵泡58.4±2.5個(gè)
9、,生長(zhǎng)卵泡6.4±1.0個(gè),成熟卵泡2.7±2.2個(gè),卵泡總數(shù)為67.7±3.5個(gè),原始卵泡數(shù)量較其他四組多,生長(zhǎng)卵泡及成熟卵泡較其他四組少,卵泡總數(shù)較生理鹽水組少,較順鉑組、銀杏黃酮+順鉑組即氨磷汀+順鉑組多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3、各組卵巢凋亡指數(shù)的結(jié)果:
生理鹽水組凋亡指數(shù)為3.6±0.7。順鉑組凋亡指數(shù)為65.3±2.9,明顯高于生理鹽水組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+
10、順鉑組凋亡指數(shù)為35.7±2.0,高于生理鹽水組,低于順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。氨磷汀+順鉑組凋亡指數(shù)為37.4±1.6,高于生理鹽水組,低于順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與銀杏黃酮+順鉑組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。亮丙瑞林+順鉑組凋亡指數(shù)為30.5±2.9,高于生理鹽水組,低于順鉑組、銀杏黃酮+順鉑組及氨磷汀+順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4、各組卵巢胞漿Cyt-c
11、及Apaf-1蛋白的含量:
順鉑組較生理鹽水組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+順鉑組,較生理鹽水組高,較順鉑組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。氨磷汀+順鉑組含量較生理鹽水組高,較順鉑組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與銀杏黃酮+順鉑組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。亮丙瑞林+順鉑組與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),較順鉑組、銀杏黃酮+順鉑組及氨磷汀+順鉑組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)
12、意義(P<0.05)。
5、各組卵巢胞漿Cyt-c及Apaf-1 mRNA的含量:
順鉑組表達(dá)高于生理鹽水組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+順鉑組表達(dá)低于生理鹽水組及順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。氨磷汀+順鉑組表達(dá)低于生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。亮丙瑞林+順鉑組表達(dá)與生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,較順鉑組低,較銀杏黃酮+順鉑組及氨磷汀+順
13、鉑組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
6、各組PA-1細(xì)胞增殖抑制率:
生理鹽水組增殖抑制率為0,順鉑組增殖抑制率為44.7%,銀杏黃酮+順鉑組增殖抑制率為56.3%,高于順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。氨磷汀+順鉑組增殖抑制率為64.0%,高于順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。亮丙瑞林+順鉑組增殖抑制率為61.5%,高于順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組,低于氨磷汀+順鉑組,
14、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
7、各組PA-1細(xì)胞胞漿Cyt-c蛋白的含量:
順鉑組含量為1.56±0.09,較生理鹽水組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+順鉑組含量為1.87±0.03,較生理鹽水組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與順鉑組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),氨磷汀+順鉑組含量為2.91±0.07,較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.
15、05)。亮丙瑞林+順鉑組含量為2.31±0.05,較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高,較氨磷汀+順鉑組低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
8、各組PA-1細(xì)胞胞漿Apaf-1蛋白的含量:
順鉑組含量為1.72±0.09,較生理鹽水組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+順鉑組含量為2.66±0.10,較生理鹽水組及順鉑組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。氨磷汀+順鉑組含量為4.35±0.
16、30,較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。亮丙瑞林+順鉑組含量為2.46±0.17,較生理鹽水組及順鉑組高,較氨磷汀+順鉑組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與銀杏黃酮+順鉑組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
9、各組PA-1細(xì)胞胞漿Cyt-c mRNA的含量:
順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的2.23±0.45倍,銀杏黃酮+順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的3.64±0.35
17、倍,氨磷汀+順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的7.56±0.66倍,亮丙瑞林+順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的4.22±0.42倍,各組間兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
10、各組PA-1細(xì)胞胞漿Apaf-1 mRNA的含量:
順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的1.91±0.23倍,較生理鹽水組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。銀杏黃酮+順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的2.72±0.45倍,較生理鹽水組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
18、<0.05),與順鉑組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。氨磷汀+順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的5.77±0.45倍,較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。亮丙瑞林+順鉑組表達(dá)為生理鹽水組的3.07±0.34倍,較生理鹽水組及順鉑組高,較氨磷汀組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與銀杏黃酮+順鉑組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:
1、順鉑對(duì)大鼠卵巢功能損傷作
19、用明顯,2mg/(kg·d)腹腔注射7天可獲得滿意的卵巢功能損傷大鼠動(dòng)物模型。
2、順鉑腹腔注射前給予銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林、對(duì)順鉑所致大鼠卵巢功能損傷有一定的保護(hù)作用,且亮丙瑞林作用優(yōu)于銀杏黃酮及氨磷汀,銀杏黃酮與氨磷汀的作用相當(dāng)。
3、順鉑對(duì)體外培養(yǎng)的PA-1細(xì)胞有明顯抑制作用,給予順鉑前給予銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林,不減弱順鉑對(duì)PA-1的抑制作用,反而有加強(qiáng)作用,可上調(diào)Cyt-c和Apaf-1mR
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