GnRHa保護(hù)化療所致大鼠卵巢功能損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著放、化療技術(shù)的提高，很多惡性腫瘤和自身免疫性疾病基本生存率提高。但放、化療本身可引起卵巢功能的損傷，使很多年輕女性放、化療后出現(xiàn)月經(jīng)紊亂、閉經(jīng)等圍絕經(jīng)期癥狀，甚至導(dǎo)致不孕。卵巢功能的喪失嚴(yán)重地影響了中青年女性的生活質(zhì)量。在提高患者生存率的同時(shí)，保護(hù)卵巢功能，預(yù)防化療后卵巢早衰的發(fā)生，對(duì)于提高患者愈后的生活質(zhì)量顯得十分重要。 目的： 研究提前應(yīng)用及同時(shí)應(yīng)用促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑(GnRHa)對(duì)化療藥物(環(huán)磷酰胺，CT

2、X)所致大鼠卵巢功能損傷的保護(hù)作用。 材料與方法： 1.清潔級(jí)Wistar近交系雌性及雄性大鼠(體重200±20g)，購(gòu)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[許可證號(hào)：SCXK(粵)2004-0011粵監(jiān)證字號(hào)20064072]。全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由攝食，室溫20℃～25℃，相對(duì)濕度45％～55％，每日光照12小時(shí)，飼養(yǎng)1周熟悉環(huán)境后，每日晨9:00取陰道分泌物涂片光鏡觀察性周期，選取有正常性周期的動(dòng)物進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。 2.環(huán)磷酰

3、胺(CTX)(0.2g×10)購(gòu)自山西普德藥業(yè)有限公司 3.注射用醋酸丙氨瑞林(GnRHa)(150ug×10)購(gòu)自安徽豐原藥業(yè)股份有限公司馬鞍山藥廠。 4.將進(jìn)入實(shí)驗(yàn)組的58只雌性大鼠隨機(jī)分成5組： (1)空白對(duì)照組(10只)：未給與任何處理。 (2)GnRHa組(12只)：丙氨瑞林5ug/d溶于0.5ml0.9％氯化鈉注射液中皮下注射，連續(xù)給藥25d。 (3)CTX組(12只)：首次負(fù)荷劑量C

4、TX50mg/(kg.d)，ip，1天；CTX8mg/(kg.d)，ip，連續(xù)14天。 (4)CTX+GnRHaⅠ組(12只)：丙氨瑞林的用量、用法及時(shí)間同GnRHa組。注射丙氨瑞林的第11天同時(shí)加用CTX，其首次負(fù)荷劑量與維持劑量及用法同CTX組。 (5)CTX+GnRHaⅡ組(12只)：丙氨瑞林的每天用量、用法同GnRHa組，連續(xù)皮下注射15d，注射丙氨瑞林的同時(shí)加用CTX，其首次負(fù)荷劑量與維持劑量及用法同CTX組。

5、 以上動(dòng)物每日行陰道細(xì)胞涂片觀察動(dòng)情周期，空白對(duì)照組在各組用藥前、停藥時(shí)、停藥后1周、2周各時(shí)間點(diǎn)同期采用放射免疫法測(cè)定大鼠促卵泡生成激素(FSH)及雌二醇(E2)，其余各組從用藥開(kāi)始至停藥后2周期間約每1個(gè)動(dòng)情周期(5～7天)測(cè)定大鼠FSH及E2。停藥時(shí)于動(dòng)情間期各組分別處死5只大鼠，心臟穿刺取血。取雙側(cè)卵巢，稱取濕重后，4％多聚甲醛固定。雙側(cè)卵巢石蠟包埋后，連續(xù)5um切片后HE染色，每10張切片取1張光鏡觀察，觀察卵巢組織切

6、片病理變化并計(jì)數(shù)具有正常卵泡結(jié)構(gòu)的卵泡數(shù)(雙側(cè)卵巢的卵泡數(shù)相加)。剩余大鼠繼續(xù)陰道涂片觀察動(dòng)情周期，于2周后各組再處死5只大鼠，方法同前。GnRHa組，CTX組，CTX+GnRHaⅠ組及Ⅱ組四組各剩余2只大鼠，與Wistar近交系雄性大鼠交配，觀察妊娠情況。 結(jié)論： 1.CTX主要損傷生長(zhǎng)卵泡及成熟卵泡。 2.GnRHa持續(xù)用藥后對(duì)FSH及E2呈抑制作用，停藥后FSH及E2可恢復(fù)正常。 3.GnRHa具有

7、募集原始卵泡的作用。 4.提前應(yīng)用GnRHa及同時(shí)應(yīng)用GnRHa不但能夠在化療過(guò)程中減少CTX對(duì)卵巢功能的損傷，而且對(duì)停藥后的后續(xù)卵巢損傷也有保護(hù)作用。其保護(hù)作用不僅反映在卵巢的內(nèi)分泌功能及儲(chǔ)備功能方面，而且保存的卵巢儲(chǔ)備功能在化療后還能夠出現(xiàn)妊娠結(jié)局，說(shuō)明對(duì)卵巢的生育功能也起到了保護(hù)作用。 5.提前應(yīng)用GnRHa與同時(shí)應(yīng)用GnRHa在保護(hù)大鼠卵巢內(nèi)分泌功能方面作用相同，但提前應(yīng)用GnRHa比同時(shí)應(yīng)用GnRHa能夠更好地