銀杏黃酮純化及生物活性的研究.pdf

1、目前工業(yè)純化工藝多采用大孔樹脂柱層析法進(jìn)行銀杏葉提取物的精制，其純度約為24％左右。本文研究銀杏葉提取物不同的純化方法及工藝，從低純度黃酮的銀杏葉提取物制備高純度黃酮提取物，這對(duì)于銀杏葉提取物的深加工及高純度黃酮的開發(fā)，有著非常高的現(xiàn)實(shí)意義，同時(shí)對(duì)于其它植物功能性物質(zhì)提取與純化也有廣泛的指導(dǎo)意義；在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步比較了黃酮苷與苷元在體內(nèi)外的生物活性的差異，驗(yàn)證了銀杏黃酮生物活性的有效形態(tài)，為充分合理地利用銀杏黃酮資源，提供了科學(xué)依據(jù)。

2、
　　 論文建立了用聚酰胺樹脂柱層析法純化銀杏黃酮的方法，在傳統(tǒng)的純化工藝基礎(chǔ)上，采用對(duì)黃酮類化合物更具選擇性的吸附劑-聚酰胺樹脂為柱層析材料，研究了聚酰胺樹脂對(duì)銀杏黃酮的吸附特性。靜態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)表明，聚酰胺樹脂對(duì)銀杏黃酮具有很好的吸附性和解吸性。樹脂達(dá)到吸附平衡的時(shí)間短(約45min)，在25℃時(shí)，聚酰胺樹脂的吸附等溫線與Langmuir、Freundlich等溫方程擬合性非常好，擬合方程分別為Ce/qe=0.0425Ce+

3、0.0314(R2=0.998)和qe=17.60Ce0.42(R2=0.980)。聚酰胺樹脂對(duì)銀杏黃酮的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)符合Langmuir吸附動(dòng)力學(xué)方程，其擬合方程為Inqe/(qe-qt)=0.638t+0.563(R2=0.995)。用聚酰胺樹脂柱層析法純化時(shí)黃酮的上樣濃度為1.41mg/mL，上樣速度為2mL/min，用30％的乙醇液作為恒組成洗脫溶劑，產(chǎn)物中的總黃酮含量由24％提高到50％以上，同時(shí)內(nèi)酯含量也由原來的6％提高到

4、9％以上。
　　 利用黃酮與金屬形成絡(luò)合物的特性，創(chuàng)造性的提出了用金屬絡(luò)合-解離法純化銀杏黃酮的方案，并研究了金屬絡(luò)合-解離純化方法的工藝條件，使黃酮含量由24％提高到55％以上。金屬絡(luò)合-解離純化方法中，甲醇較乙醇更適合作為絡(luò)合反應(yīng)的溶劑，硫酸鋅由于絡(luò)合能力強(qiáng)并隨pH值變化明顯，是合適的金屬絡(luò)合劑，最佳絡(luò)合反應(yīng)發(fā)生的pH值為9.5，合成的黃酮與金屬的絡(luò)合物在以EDTA為解絡(luò)合劑，以30％的乙醇水溶液為反應(yīng)液中進(jìn)行解離反應(yīng)，得到

5、游離的黃酮和EDTA-Zn絡(luò)合物，最后用甲醇將兩者分離，得到黃酮含量更高的產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)，純化后的黃酮無論外觀還是抗氧化性質(zhì)都沒有受到絡(luò)合-解離過程的影響。用高效液相色譜法檢測(cè)純化后樣品組成的變化，結(jié)果顯示以槲皮素為苷元的黃酮提高的量最多，其次是以山奈酚為苷元的黃酮，而以異鼠李素為苷元的黃酮純化前后含量變化不是很大，經(jīng)分析這是由不同苷元與金屬絡(luò)合反應(yīng)的難易程度引起的。金屬絡(luò)合反應(yīng)離心后清液經(jīng)過乙酸乙酯萃取法可以得到含量大于80％的銀杏內(nèi)酯

6、產(chǎn)品。
　　 利用制備的高黃酮含量的銀杏葉提取物為原料，確定了酸水解工藝制備黃酮苷元。工藝條件為水解溫度80℃，鹽酸為25％，與甲醇配成體積分?jǐn)?shù)為1:4溶液，原料濃度為1mg/mL的條件下，水解2h，黃酮的得率為90％。采用高效液相色譜及液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)水解前后樣品，結(jié)果表明水解前黃酮主要以糖苷形式存在，經(jīng)質(zhì)譜鑒定水解后產(chǎn)品主要含三種苷元即為槲皮素、山奈酚和異鼠李素。
　　 采用體外DPPH、OH、H2O2等自由基清除能力和

7、還原力的比較及黃酮分別在大豆油和鼠腦勻漿體系中抑制脂質(zhì)氧化的活性比較，比較了糖苷型和苷元型銀杏黃酮體外生物活性的差異。結(jié)果表明，體外清除自由基及抑制脂質(zhì)氧化的能力為苷元型黃酮＞糖苷型黃酮，并存在劑量依賴關(guān)系。本文對(duì)兩種形態(tài)的黃酮的抗氧化作用與結(jié)構(gòu)關(guān)系進(jìn)行了初步探討，認(rèn)為這種活性的差異可能是由于糖苷鍵的形成減少了黃酮分子中的活性羥基等因素有關(guān)。
　　 采用D-半乳糖致衰老的小鼠模型，將糖苷型和苷元型銀杏黃酮分別對(duì)模型小鼠灌胃4周后