ICR小鼠腸道乳酸菌的多樣性分析及其組成與糖尿病關(guān)系的初步研究.pdf

1、人和動物腸道內(nèi)共生著數(shù)目龐大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的微生物群落，其中乳酸菌被公認為對宿主有著眾多有益的作用。近年來，通過對眾多益生乳酸菌的研究，人們發(fā)現(xiàn)乳酸菌對宿主的健康功效具有菌株特異性，而且其益生作用在一定程度上受宿主腸道內(nèi)菌群，特別是內(nèi)生乳酸菌的影響。因此，對常用于測試益生菌作用的實驗小鼠體內(nèi)乳酸菌結(jié)構(gòu)組成的詳細分析將會對益生菌功效及作用機理的研究提供很大幫助。此外，我們實驗室在采用分子生態(tài)學(xué)的方法來研究腸道菌群與STZ（鏈脲佐菌素）誘導(dǎo)的I

2、CR小鼠糖尿病之間的關(guān)系時，發(fā)現(xiàn)一些乳桿菌與糖尿病的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系。因此，本論文詳細分析了ICR小鼠腸道內(nèi)乳酸菌的結(jié)構(gòu)組成，并根據(jù)“序列引導(dǎo)下的分離”，分離得到了一些可能與糖尿病相關(guān)的乳桿菌類型，并通過進一步的動物實驗來驗證這些乳桿菌與糖尿病發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。 本文采用MRS乳酸菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基對一只雄性ICR小鼠糞便樣品中的乳酸菌進行分離培養(yǎng)，共得到96株乳酸菌分離物。運用核糖體DNA的PCR擴增產(chǎn)物限制性內(nèi)切酶

3、酶切分析（ARDRA，Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis）、ERIC-PCR（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence)指紋圖譜以及16S rRNA基因測序技術(shù)對這些分離物進行菌株水平多樣性的分析和菌種鑒定。結(jié)果顯示這些乳酸菌分離物均屬于乳桿菌屬，分屬于四個種，其中羅伊氏乳桿菌（51株）和約氏乳酸菌（30株）占總

4、乳酸菌數(shù)量的75％以上，為最優(yōu)勢的兩個種。另外羅伊氏乳桿菌和約氏乳桿菌分別被分成5個和2個ERIC-PCR圖譜類型，表明這兩個種具有高度的菌株水平多樣性。該個體糞便樣品的乳酸菌類群特異性PCR-變性梯度凝膠電泳（PCR-DGGE）和乳酸菌類群特異性克隆文庫的結(jié)果均證明分離得到的乳酸菌分離物能夠準確代表該個體腸道內(nèi)乳酸菌的組成和結(jié)構(gòu)。這說明腸道內(nèi)同一乳酸菌種內(nèi)的不同菌株可能含有不同的功能基因，這對于進一步研究腸道內(nèi)生乳桿菌以及外源益生菌的

5、生態(tài)適應(yīng)性（ecological adaptation）具有重大意義。 通過乳酸菌類群特異性PCR-DGGE條帶比對以及ERIC-PCR指紋圖譜分型技術(shù)，共獲得6株與糖尿病具有潛在關(guān)系的乳桿菌。將此6株乳桿菌混合物回接入ICR小鼠來驗證乳桿菌和STZ誘導(dǎo)的糖尿病之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組（灌胃此混合物）的造模成功率（72％）較模型對照組（灌胃對照試劑）的造模成功率（90％）有所下降，但實驗組動物在造模后陸續(xù)死亡，而對照組動物正