Smad7參與腫瘤TGF-β信號傳導機制的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學碩士學位論文Smad7參與腫瘤TGFβ信號傳導機制的研究姓名：周欣申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學（消化病學）指導教師：李定國2001.4.1fRT—PCR分析結果顯示，LOVO細胞Smad7mRNA表達最強，k川K562細胞最弱。TGF—B；與腫瘤細胞共育可以誘導Smad7mRNA自j表達，二三種腫瘤細胞株的Smad7mRNA表達在刺激15小時后達到高峰。我們注意到，當刺激時間達到24小時，SMMC772l細胞自JSma

2、d7mRNA表達仍持續(xù)升高，而其它兩株則已降至較低水平。Westernblot方法檢測Smad7蛋白的結果顯示，蛋F的表達情；，：與tuRNA相近，三種細胞株的Smad7蛋白表達量不同，LOVO約胞表達最強，SMMC772l細胞其次，K562細胞最弱。經(jīng)與TGF。D共育后對各細胞組內(nèi)Smad7蛋白的影響與mRNA的變化趨勢夫致相同。通過免疫細胞化學技術更直觀地展示Smad7蛋白的胞內(nèi)定位。三種腫瘤細胞株Smad7蛋白的胞內(nèi)定位有所不同：

3、LOVO細胞Smad7籃白的表達主要位于胞核；給予外源性TGF—D，刺激后，Smad7蛋：從胞核向胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)移，以完成其作為I型受體絲氨酸／蘇氨酸激酶結構域拮抗物的生物功能。與LOVO細胞不同的是：SMMC772l與K562細胞株在與TGFB共育前后Smad7蛋白均主要定位于胞漿區(qū)，胞核則鮮見表達。與TGFD，共育15小時后，SMMC7721細胞Smad7蛋白分布于核周區(qū)，形成以核為中心的環(huán)戒狀結構，共育24小時后該環(huán)戒狀結構彌散，與TG

4、F—p、共育后K562細胞株即出現(xiàn)陽性顆粒濃聚并粘附于胞核表面的現(xiàn)象。研究顯示TGFD，并未顯著改變SMMC772l及K562細胞的Smad蛋白胞內(nèi)定位，提示Smad7蛋自主要在胞漿內(nèi)實施其拮抗功能。綜』二所述，Smad7mRNA存三種腫瘤細胞株中的表達強度不同，作為早期即時反應的基因，Smad7的表達可由TGFpj誘導，但值得往意的是其表達的增強為‘一過性及短時期的。Smad7蛋白的表達與其mRNA的表達一致，提示Smad7的表達及其