關(guān)于雌激素受體在人涎腺腫瘤和舌癌細(xì)胞的表達(dá)的研究.pdf

1、雌激素制劑目前在臨床上被廣泛應(yīng)用于治療女性更年期綜合征、晚期乳腺癌、前列腺癌；預(yù)防老年癡呆、心血管疾病、骨質(zhì)疏松；還有美容和保健等?？墒?，越來(lái)越多的研究表明雌激素具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移的潛在危險(xiǎn)。雌激素在體內(nèi)主要與其受體(ER)結(jié)合來(lái)發(fā)揮生物學(xué)作用。ER屬甾體激素受體超家族成員，是存在于細(xì)胞核與胞漿中的一種對(duì)雌激素有高度親合力的蛋白質(zhì)。ER有ERα和ERβ兩種亞型，兩者既相似又有區(qū)別，ERα、ERβ表達(dá)比例是決定細(xì)胞對(duì)雌激素藥物和雌

2、激素拮抗藥反應(yīng)的重要因素。有研究表明ERα和ERβ比例的改變可能與腫瘤的發(fā)生、惡性程度和轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)，此類研究尚處于初始階段。以前的研究大多數(shù)圍繞性器官乳腺、卵巢、子宮腫瘤，按照ER的多寡，人們將腫瘤劃分為激素依賴性和非依賴性兩種。如此就把腫瘤細(xì)胞內(nèi)激素受體含量水平，視為預(yù)測(cè)內(nèi)分泌治療效果及判斷預(yù)后的指征，有報(bào)道指出ER水平也可反映腫瘤組織學(xué)分型和惡性程度。 人們發(fā)現(xiàn)除生殖系統(tǒng)腫瘤外，胃癌、結(jié)腸直腸癌、肝癌、胰腺癌、食管鱗癌、肺

3、鱗癌、黑色素瘤及皮膚腫瘤等許多組織中有不同程度的雌激素受體存在。提示這些腫瘤可能是激素依賴性腫瘤，其產(chǎn)生、發(fā)展受到雌激素的調(diào)控。ER的檢測(cè)為惡性腫瘤的診斷、預(yù)后判斷提供了一定依據(jù)，對(duì)于ER陽(yáng)性的腫瘤聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)分泌治療有著良好的前景。 口腔涎腺腫瘤和鱗癌發(fā)病因素多樣，內(nèi)分泌失調(diào)是原因之一，其發(fā)生發(fā)展是否受到ER的調(diào)控國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道?？谇活M面部腫瘤的治療目前仍以傳統(tǒng)的手術(shù)結(jié)合放療和化療，沒(méi)有較理想的方法判斷其預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)室以往研

4、究表明雌激素能促進(jìn)人粘液表皮樣癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，并且這種作用可被其受體阻滯劑Tamoxifen阻滯；董紀(jì)軍等研究發(fā)現(xiàn)生理劑量E2對(duì)人腺樣囊性癌SAcc83細(xì)胞有明顯的促增殖和轉(zhuǎn)移作用，認(rèn)為E2的臨床應(yīng)用應(yīng)該慎重。劉亞莉等發(fā)現(xiàn)E2對(duì)舌癌細(xì)胞的增殖分化有顯著的調(diào)控作用。本研究以涎腺粘液表皮樣癌，腺樣囊性癌和舌癌為例，選取MEC-1及其高轉(zhuǎn)移株Mc3；Tca8113及其腦轉(zhuǎn)移株Tb；ACC-2及其肺轉(zhuǎn)移株ACC-M，運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法、R

5、T-PCR方法、流式細(xì)胞儀結(jié)合活細(xì)胞免疫熒光技術(shù)和Western蛋白印跡技術(shù)分別從mRNA水平和蛋白水平對(duì)ER在這些腫瘤細(xì)胞中的ER表達(dá)進(jìn)行定性和半定量分析，并對(duì)不同腫瘤細(xì)胞之間ER含量高低進(jìn)行橫向比較。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示ER免疫陽(yáng)性物質(zhì)主要存在于細(xì)胞核中，少量存在于胞漿。舌癌細(xì)胞染色強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多；腺樣囊性癌細(xì)胞著色較淡，接近陰性；粘液表皮樣癌細(xì)胞染色和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與舌癌細(xì)胞接近。 2.RT

6、-PCR結(jié)果顯示除ACC-M均為陰性外，其它細(xì)胞系ERαmRNA和ERβmRNA均有表達(dá)，但陽(yáng)性條帶亮度有所不同。應(yīng)用圖像分析軟件進(jìn)行灰度值半定量分析：ERαmRNA表達(dá)量由高到低依次為Tb、Tca8113、Mc3、MEC-1和ACC-2，其中TbERα表達(dá)量略高于陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞T-47D。ERαmRNA/ERβmRNA比值的改變?cè)谏喟┲修D(zhuǎn)移株與其原始腫瘤株相比是升高的；在粘液表皮樣癌和腺樣囊性癌中轉(zhuǎn)移株與其原始腫瘤株相比ERα/ERβ比

7、值是降低的。結(jié)合以往研究認(rèn)為ERαmRNA/ERβmRNA比值的降低可能和腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。 3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)ER抗原：ER陽(yáng)性率分別為：舌癌Tca8113為78.7％，Tb為95.1％；粘液表皮樣癌MEC-1為74.6％，Mc3為77.2％；腺樣囊性癌ACC-2為16.7％，ACC-M為2.1％。ACC-M的ER小于5％，為陰性。以每種細(xì)胞的陽(yáng)性百分率和其自身陰性對(duì)照熒光率之差作為比較不同細(xì)胞之間ER表達(dá)的相對(duì)參數(shù)。ER

8、陽(yáng)性率由高到低依次為Tb、Tca8113、Mc3、MEC-1和ACC-2。 4.Weternblotting結(jié)果顯示人舌癌細(xì)胞和粘液表皮樣癌細(xì)胞中均有ER蛋白的表達(dá)，而腺樣囊性癌細(xì)胞中ER蛋白表達(dá)極弱，其肺轉(zhuǎn)移株ACC-M表達(dá)呈陰性，與前幾種方法結(jié)果相符合。 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用不同方法所得結(jié)果基本一致。組織中性激素受體的有無(wú)及多少是判斷患者腫瘤與性激素依賴關(guān)系的依據(jù)。粘液表皮樣癌、舌癌細(xì)胞中ER的較高表達(dá)說(shuō)明這些腫瘤對(duì)雌激素有一

9、定的依賴性，對(duì)這些腫瘤采取內(nèi)分泌治療可能有效。腺樣囊性癌雖然組織學(xué)上與乳腺腺樣囊性癌很相像，但是ER表達(dá)很低或?yàn)殛幮?，一方面說(shuō)明雌激素對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞的促增殖、轉(zhuǎn)移作用可能通過(guò)其非受體途徑完成，另一方面ER的缺失可能反映了腫瘤細(xì)胞的去分化特征。本研究結(jié)果表明ER可能與舌癌、粘液表皮洋癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)，并為口腔頜面部腫瘤的病因?qū)W研究以及臨床治療提供新的思路。ERα、ERβ的檢測(cè)能否作為口腔腫瘤惡性程度、轉(zhuǎn)移潛能和判斷其預(yù)后的標(biāo)志，