Survivin在人涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的： 涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)是口腔頜面部一類(lèi)較兇惡的腫瘤，常好發(fā)于近年來(lái)，水環(huán)境中耐藥菌種類(lèi)、數(shù)量、多重耐藥率的不斷增加日益受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。研究結(jié)果顯示，耐藥菌存在于各種各樣的水體中，包括污水、礦泉水、管網(wǎng)水、飲用水、海水。 自然界中各種細(xì)菌廣泛存在，相互聯(lián)系；細(xì)菌具有多種在種內(nèi)或種間進(jìn)行自主轉(zhuǎn)移或誘動(dòng)轉(zhuǎn)移的遺傳因子如質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、噬菌體等；

2、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子上還有募集和表達(dá)外源耐藥基因的整合子，通過(guò)接合、轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式，細(xì)菌間相互間交換所攜帶的一些基因，可使菌群更好地適應(yīng)環(huán)境。 水環(huán)境作為耐藥基因傳播的媒介，其龐大的耐藥基因庫(kù)，為進(jìn)入該環(huán)境中的致病菌及條件致病菌提供獲得大量耐藥基因的機(jī)會(huì)，一旦這些致病菌再次入侵人體，引起感染，其治療將非常困難。 產(chǎn)ESBLs(Extended-Spectrum β-Lactamases，超廣譜β-內(nèi)酰胺酶)菌在水環(huán)境中的出現(xiàn)應(yīng)

3、引起高度重視。ESBLs主要由腸桿菌科產(chǎn)生，大多為T(mén)EM-1、TEM-2、SHV-1的突變酶。其特點(diǎn)是能水解青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)及單環(huán)類(lèi)抗生素，因其作用底物廣泛被稱(chēng)作超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。ESBLs主要由質(zhì)粒介導(dǎo)，目前已成為介導(dǎo)革蘭陰性桿菌對(duì)新型廣譜β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥的主要原因。根據(jù)2005年CLSI規(guī)定，如果臨床出現(xiàn)產(chǎn)ESBLs菌株，則對(duì)第三代頭孢菌素(頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢曲松等)耐藥，同時(shí)對(duì)單環(huán)酰胺類(lèi)抗生素(氨曲南)

4、耐藥。Sharma等在印度馬德里的水體中檢測(cè)出產(chǎn)ESBLs小腸結(jié)腸炎耶爾森菌；Cernat等也在水生環(huán)境中分離出7株產(chǎn)ESBLs陰溝腸桿菌，且通過(guò)RAPD和PFGE將其分為兩種亞型。本室劉小云前期分離出的耐熱性大腸菌群中產(chǎn)ESBLs初篩實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率為18.75％，提示在國(guó)內(nèi)水體中也存在產(chǎn)ESBLs的菌株。如果這些水環(huán)境中的產(chǎn)ESBLs菌株耐藥基因能在致病菌和條件致病菌之間傳播，人群一旦通過(guò)飲用或開(kāi)放性傷口被水體中產(chǎn)ESBLs菌株感染，將導(dǎo)

5、致治療和控制上的極大困難。 目前為止，國(guó)內(nèi)污水環(huán)境中的耐藥菌生存情況及特點(diǎn)，產(chǎn)ESBLs菌在該環(huán)境中的流行情況，分子水平特點(diǎn)，不同水環(huán)境的生存規(guī)律以及各種因素對(duì)其生長(zhǎng)的影響等情況還不清楚。部的小涎腺。該腫瘤起病隱蔽，有沿著周?chē)M織的神經(jīng)血管呈潛行性生長(zhǎng)的特性，通常無(wú)疼痛等自覺(jué)癥狀，但較早就可經(jīng)血道出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。該腫瘤對(duì)常規(guī)的化療、放療治療措施不敏感，手術(shù)切除后也容易復(fù)發(fā)，因而綜合治療效果和遠(yuǎn)期治療效果均不理想，對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成了極大的

6、威脅。所以深入研究sACC的生物學(xué)特性，積極尋求SACC的有效治療方式成為了口腔頜面外科學(xué)和腫瘤學(xué)學(xué)者們孜孜以求的目標(biāo)。國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者通過(guò)篩選和比較后認(rèn)為：基因治療可能是未來(lái)針對(duì)SACC最具潛力的有效根治方法。因此，深入研究SACC的生物學(xué)特性，從基因和蛋白水平，探討SACC的發(fā)生機(jī)制，尋找與SACC的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記成為目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。 同其他惡性腫瘤一樣，SACC也存在腫瘤細(xì)胞異樣增殖和細(xì)胞凋亡顯著不足

7、的生物學(xué)特性。而有關(guān)腫瘤細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制方面的研究也己日漸深入，各種各樣的凋亡抑制因子不斷發(fā)現(xiàn)。Survivin就是一種調(diào)控作用極強(qiáng)的凋亡抑制因子，它最早由美國(guó)耶魯大學(xué)的Altieri在1997年首先分離成功，其主要作用有：1、抑制細(xì)胞凋亡；2、促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化；3、調(diào)控細(xì)胞周期；4、參與血管生成。目前，Survivin常常作為一種標(biāo)志性的癌基因，用于多種惡性腫瘤的相關(guān)研究。但sACC中有無(wú)Survivin的合成與表達(dá)?以及Survi

8、vin在SACC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用和意義如何?目前，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)均未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬用免疫組化等方法觀察Survivin是否在SACC中有表達(dá)，并進(jìn)一步探討Survivin與SACC發(fā)生發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系。 方法： 本實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行。第一部分：隨機(jī)抽取有隨訪記錄的SACC石蠟標(biāo)本38例，手術(shù)時(shí)間為1988-2004，手術(shù)單位為我院及重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院口腔頜面外科。采用免疫組織化學(xué)(SP)法和TUNEL染色方法對(duì)S

9、ACC標(biāo)本中Survivin的表達(dá)及細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)合臨床病理特征和隨訪資料進(jìn)行分析，研究Survivin表達(dá)的臨床意義。第二部分：通過(guò)對(duì)ACC-2、ACC-M細(xì)胞株的培養(yǎng)，掌握ACC-2、ACC-M的形態(tài)學(xué)特征，并用免疫細(xì)胞化學(xué)(SP)法檢測(cè)腺樣囊性癌細(xì)胞(ACC-2)及肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞(ACC-M)中Survivin的表達(dá)，探討Survivin在SACC細(xì)胞系中的表達(dá)強(qiáng)度與SACC細(xì)胞轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果： 一、SACC

10、的Survivin表達(dá)SACC細(xì)胞的Survivin表達(dá)位于細(xì)胞漿部位，呈棕黃色顆粒狀，正常的涎腺組織中未見(jiàn)Survivin表達(dá)。本組38例SACC標(biāo)本中有26例Survivin表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為68.4％(26/38)。 二、Survivin的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系相關(guān)分析研究表明：SACC的survivin表達(dá)與否與患者的年齡、性別、部位、病理類(lèi)型、腫瘤大小、臨床分期、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)。 三、

11、Survivin表達(dá)與SACC細(xì)胞凋亡指數(shù)AI的關(guān)系SACC的Survivin表達(dá)與細(xì)胞的凋亡指數(shù)相關(guān)。survivin表達(dá)陽(yáng)性組平均凋亡指數(shù)為(0.61％±0.19％)，而survivin表達(dá)陰性組的平均凋亡指數(shù)為(3.24％±0.38％)，其差異有顯著意義(P<0.001)。 四、Survivin表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系SACC標(biāo)本中survivin表達(dá)與患者預(yù)后直接相關(guān)。Survivin表達(dá)陽(yáng)性患者，其術(shù)后5年存活率為38.5％(

12、10/26)，而Survivin表達(dá)陰性患者的5年存活率為83.3％(10/12)，兩組間有顯著性差異(P<0.05)。 五、形態(tài)學(xué)觀察在倒置相差顯微鏡下，ACC-2和ACC-M細(xì)胞均貼壁生長(zhǎng)，為多角形上皮樣細(xì)胞核大，類(lèi)圓形，核仁多個(gè)清晰可見(jiàn)，胞漿內(nèi)可看到透亮度深淺不等的顆粒，細(xì)胞分裂相多見(jiàn)，并有多極核分裂，排列緊密時(shí)似鋪路石樣，密度過(guò)高時(shí)可重疊生長(zhǎng)，表現(xiàn)為接觸抑制消失。 HE染色光鏡下可見(jiàn)核略偏位，胞漿外圍著色較深，內(nèi)

13、有淡染區(qū)。核為淺紫色，細(xì)胞分裂相多見(jiàn)，可見(jiàn)多核巨細(xì)胞。兩細(xì)胞株均表現(xiàn)有明顯的上皮樣細(xì)胞和腺樣特征，符合其來(lái)源于腺上皮細(xì)胞的特點(diǎn)。 六、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線ACC-2和ACC-M在接種后第二天代表細(xì)胞數(shù)量的OD值開(kāi)始回升，細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”型。 七、ACC-2和ACC-M中Survivin的表達(dá)免疫細(xì)胞化學(xué)研究結(jié)果顯示：ACC-M細(xì)胞胞漿區(qū)顆粒狀棕黃色著色較ACC-2明顯。其灰度值分別為168.55±10

14、.96和126.00+13.06(P<0.05)，Survivin在ACC-M細(xì)胞中的表達(dá)明顯強(qiáng)于ACC-2細(xì)胞。 結(jié)論： Survivin在SACC組織中高表達(dá)，在正常涎腺組織中未見(jiàn)表達(dá)。Survivin在SACC中的表達(dá)，與個(gè)體的年齡、性別、部位、病理類(lèi)型、腫瘤大小、臨床分期、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，僅與腫瘤細(xì)胞的凋亡和預(yù)后有關(guān)；SACC細(xì)胞系中Survivin的表達(dá)程度與肺部轉(zhuǎn)移的發(fā)生具有高度相關(guān)性。因此，對(duì)SACC組織