中藥甘松揮發(fā)油對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜鈉通道的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度甘松揮發(fā)油對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞膜鈉通道電流（INa）的影響，以及甘松揮發(fā)油對(duì)INa電流-電壓（I-V）曲線、激活曲線和失活曲線的影響，探討甘松揮發(fā)油在離子通道水平抗心律失常的作用機(jī)制。 方法： 1.用急性酶解法分離大鼠心室肌細(xì)胞。以肝素抗凝，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，取大鼠心臟懸掛與Langendorff灌流儀行逆行灌流，先以無鈣臺(tái)氏液灌流心臟約5分鐘，再以50微摩爾/升（μmol/L）低鈣酶液灌流心臟，待心臟質(zhì)

2、地明顯松軟，則停止酶液消化，沖洗灌流系統(tǒng)及心臟中殘留酶液，將心室肌組織塊置于盛有KB液的燒杯中充分剪碎、輕輕吹打、過濾后置于KB液中室溫下孵育1～2小時(shí)。 2.應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)，保持細(xì)胞鉗制電位（holding potential，HP）在-90mV，選取紋理清晰、桿狀和大小適中的細(xì)胞在室溫下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以電阻為1.0～3.0MΩ的玻璃微電極封接大鼠心室肌細(xì)胞，待封接電阻至吉?dú)W（GΩ）水平破膜，補(bǔ)償串聯(lián)電阻和細(xì)胞膜電容（C

3、m），記錄不同濃度的甘松揮發(fā)油對(duì)INa的影響。 結(jié)果： 1.分別以濃度為1、3、5、10、100μg/g甘松揮發(fā)油作用大鼠心室肌細(xì)胞鈉通道電流，其抑制率分別為8.0±2.9％、20.9±3.5％、53.9±7.8％、74.9±3.4％、94.7±3.6％（每個(gè)濃度n=5，P<0.05），采用I=Ima×Cn/（Cn+EC50n）方程進(jìn)行擬合，半數(shù)有效濃度EC50值為4.74±0.59，斜率因子為2.08±0.50；

4、 2.以濃度為5μg/g甘松揮發(fā)油灌流液作用大鼠心室肌細(xì)胞進(jìn)行對(duì)照研究，保持細(xì)胞HP為-90mV，給藥前INa的激活電位為-70mV，電流密度在膜電位為-30mV時(shí)達(dá)最大值，其值為（-44.7±10.3）pA/pF，翻轉(zhuǎn)電位為20mV；在濃度為5μg/g甘松揮發(fā)油灌流法給藥后，INa的激活電位仍為-70mV，電流密度在膜電位在-30mV時(shí)達(dá)最大值，值為（-20.3±4.6）pA/pF，翻轉(zhuǎn)電位為20mV。給藥前后INa激活電位、峰電位

5、和翻轉(zhuǎn)電位無改變，峰值電流密度變化有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=5，P<0.05）； 3.以濃度為5μg/g甘松揮發(fā)油作用鈉通道，使激活曲線半數(shù)激活電壓（V1/2）從（-48.66±0.76）mV右移至（-43.94±1.02）mV（n=5，P<0.05）； 4.以濃度為5μg/g甘松揮發(fā)油作用INa，使失活曲線半數(shù)失活電壓（V1/2）從（-100.48±0.71）mV左移至（-109.82±0.86）mV（n=5，P<0.0