姜黃揮發(fā)油對皮膚鱗癌A431細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：研究姜黃揮發(fā)油對人皮膚鱗癌（CSCC）A431（以下簡稱A431）細(xì)胞增殖與凋亡的影響，并探究其凋亡機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用不同濃度的姜黃揮發(fā)油分別作用于皮膚鱗癌A431細(xì)胞24h、36h、48h，用Cell Counting Kit-8（CCK-8）檢測增殖抑制率；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；吖啶橙（AO）/溴化乙錠（EB）雙染色熒光顯微鏡觀察A431細(xì)胞凋亡情況；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡；Western blot法檢測半胱

2、氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9)表達(dá)量。
　　結(jié)果：本實驗通過CCK-8檢測不同濃度（0、5、10、20、40、80μmol/L）姜黃揮發(fā)油作用人皮膚鱗癌A431細(xì)胞24h、36h、48h后，表現(xiàn)出不同大小的抑制作用，藥物濃度從低濃度至高濃度，抑制率呈增高趨勢，且其作用方式呈現(xiàn)劑量依賴性.作用24h后，當(dāng)藥物濃度達(dá)到10 mg/L,倒置顯微鏡下觀察到當(dāng)加入藥物后，表現(xiàn)為

3、細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞增殖速度明顯變慢，AO/EB染色后可見部分早期凋亡細(xì)胞，核染色質(zhì)著黃綠色或黃色；當(dāng)藥物濃度達(dá)到20 mg/L，細(xì)胞核固縮，部分腫瘤細(xì)胞膜開始破裂，可見部分細(xì)胞內(nèi)容物釋放，AO/EB染色后可見部分黃色熒光的早期凋亡細(xì)胞和呈橘紅色熒光的晚期凋亡細(xì)胞；當(dāng)藥物濃度達(dá)到40 mg/L，腫瘤細(xì)胞明顯減少，部分細(xì)胞裂解成細(xì)胞碎片，并有大量漂浮細(xì)胞，AO/EB染色后可見大量細(xì)胞核染色質(zhì)呈橘紅色，并可見橘紅色壞死細(xì)胞及碎片；流式細(xì)胞儀

4、檢測表明姜黃揮發(fā)油對皮膚鱗癌A431細(xì)胞具有促進(jìn)凋亡作用，且隨著藥物濃度的增加，呈藥物濃度-凋亡率正相關(guān)性；Western blot法檢測結(jié)果半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9)表達(dá)量隨著藥物濃度增加而增加，呈一定范圍范圍內(nèi)濃度依賴性，且同一藥物濃度作用下，Caspase-3蛋白表達(dá)量均多于Caspase-9。
　　結(jié)論：姜黃揮發(fā)油對皮膚鱗癌A431細(xì)胞具有增殖抑制及促