姜黃揮發(fā)油對(duì)肺癌細(xì)胞及血管生成抑制作用的研究.pdf

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類的生命健康[1]。而目前各種治療肺癌的方法效果都不能令人滿意。因此，尋找安全、有效的藥物是肺癌治療中的重要課題。 隨著近年來全球范圍內(nèi)新合成化學(xué)物質(zhì)的增多，環(huán)境致癌物對(duì)人類健康造成的威脅日趨嚴(yán)重，從天然植物中尋找抗癌有效成份已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)問題，充分利用藥用植物資源開發(fā)新的抗腫瘤藥物，成為肺癌研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容。 中藥姜黃為姜黃屬植物姜黃的干燥根莖，是常用的一種活血化淤

2、中藥，具有破血行氣、通經(jīng)止痛、祛風(fēng)療痹等功效，其主要有效成分為姜黃揮發(fā)油和姜黃素。中藥姜黃資源豐富、價(jià)格低廉。其揮發(fā)油含量高、提取方便、無副作用。研究證實(shí)姜黃揮發(fā)油具有抗菌、抗炎、去痰、止咳、平喘等作用。 近年來，姜黃揮發(fā)油抗腫瘤作用引起人們極大的關(guān)注。最近研究表明姜黃揮發(fā)油能抑制人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60和肝胚細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞株的增殖，并能促進(jìn)BALB/C小鼠脾細(xì)胞的增殖[5]。目前尚未見有關(guān)姜黃揮發(fā)油對(duì)肺癌方面作

3、用的文獻(xiàn)報(bào)道。 Folkman認(rèn)為，有兩種細(xì)胞群共同影響著腫瘤的生長，一種是高突變率的腫瘤細(xì)胞群，另一種是低突變率的內(nèi)皮細(xì)胞群，兩種細(xì)胞群通過旁分泌相互刺激生長。因此在治療中同時(shí)以兩種細(xì)胞群為靶點(diǎn)，比單獨(dú)針對(duì)腫瘤細(xì)胞群的細(xì)胞毒治療，可能會(huì)更有效[6]。 本課題從研究姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞及血管生成的作用入手，觀察姜黃揮發(fā)油對(duì)肺癌細(xì)胞及血管生成的作用，并探討其可能的機(jī)制，為深入研究姜黃揮發(fā)油的抗腫瘤作用提供實(shí)驗(yàn)依

4、據(jù)。 本課題主要包括以下內(nèi)容：(一)姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺癌細(xì)胞體外作用的實(shí)驗(yàn)研究1.采用MTT法測(cè)定姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響。 2.采用姬姆薩(Giemsa)染色、丫啶橙熒光染色法、流式細(xì)胞儀、透射電鏡觀察姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的作用。 (二)姜黃揮發(fā)油抑制血管生成的實(shí)驗(yàn)研究。1.采用MTT法測(cè)定姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。 2.采用Giemsa染色、丫啶橙熒光染色法

5、測(cè)定姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響。 3.觀察姜黃揮發(fā)油對(duì)由人肺腺癌A549細(xì)胞誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小管形成的作用。 4.觀察姜黃揮發(fā)油對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響。 5.用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)姜黃揮發(fā)油對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)與堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)蛋白表達(dá)的變化。探討姜黃揮發(fā)油對(duì)腫瘤血管生成的作用機(jī)制。 主要結(jié)果1.姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞及人肺微血管

6、內(nèi)皮細(xì)胞的增殖均有抑制作用，具有明顯的量效和時(shí)效性。姜黃揮發(fā)油抑制人肺腺癌A549細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的濃度明顯高于抑制人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的濃度，其對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞作用的半數(shù)抑制濃度(IC50)為1.7μl/ml，對(duì)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的半數(shù)抑制濃度(IC50)為0.65μl/ml，表明姜黃揮發(fā)油對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖抑制作用更為明顯。 2.姜黃揮發(fā)油作用于人肺腺癌A549細(xì)胞及人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞后均可出現(xiàn)典型

7、的凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征，可見胞體縮小、變圓，細(xì)胞核固縮，凋亡小體形成等。 3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)：姜黃揮發(fā)油作用于人肺腺癌A549細(xì)胞48h，可引起細(xì)胞凋亡，凋亡比例隨濃度的增加而增加。其將人肺腺癌A549細(xì)胞阻滯于S期。 4.在人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞小管形成實(shí)驗(yàn)中：姜黃揮發(fā)油濃度≥0.6μl/ml，作用時(shí)間≥6天時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞小管形成數(shù)較陰性對(duì)照組減少非常顯著(p＜0.01)。 5.在雞胚絨毛尿囊膜血管生成實(shí)驗(yàn)中：姜

8、黃揮發(fā)油作用濃度≥0.2μl/ml，實(shí)驗(yàn)組的微血管樣結(jié)構(gòu)數(shù)目明顯減少，與對(duì)照組相比差異有顯著性(p＜0.01)。 6.采用免疫細(xì)胞化學(xué)和圖象分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)：姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞VEGFbFGF蛋白表達(dá)具有明顯抑制作用(p＜0.05)。 結(jié)論1.姜黃揮發(fā)油對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖有抑制作用，這種作用具有明顯的時(shí)間和濃度依賴性。臨床可能對(duì)肺癌有治療作用。 2.姜黃揮發(fā)油可誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡，將細(xì)

9、胞阻滯于S期，抑制DNA復(fù)制。提示其抗腫瘤機(jī)制與誘導(dǎo)凋亡有關(guān)。 3.姜黃揮發(fā)油抑制人肺腺癌A549細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的濃度明顯高于對(duì)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制濃度。表明姜黃揮發(fā)油對(duì)腫瘤細(xì)胞群和內(nèi)皮細(xì)胞群均具有抑制作用，為具有雙重作用的抗腫瘤藥。 4.姜黃揮發(fā)油能夠明顯抑制雞胚絨毛尿囊膜的血管生成及人肺腺癌A549細(xì)胞誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞小管形成，其機(jī)理可能與抑制血管生成促進(jìn)因子(VEGFbFGF)的表達(dá)、抑制血管內(nèi)皮