5-ALA-PDT誘導(dǎo)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞凋亡的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：皮膚鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)是表皮角質(zhì)形成細(xì)胞異常增生而形成的一種表皮或附屬器的惡性腫瘤，增長迅速，惡性程度較高，應(yīng)用傳統(tǒng)治療方法容易造成面容及器官功能等不同程度的損傷，光動(dòng)力療法(Photodynamic therapy,PDT)是近年快速發(fā)展的治療皮膚惡性腫瘤的新方法，可選擇性殺死腫瘤細(xì)胞而對(duì)鄰近的正常組織影響較小，療效理想。本研究試圖通過體外實(shí)驗(yàn)與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)合，為臨床應(yīng)用5-AL

2、A-PDT治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法：
　　(1)應(yīng)用MTT法測定不同藥物濃度及培養(yǎng)時(shí)間下5-ALA-PDT對(duì)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞的影響，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測5-ALA-PDT后不同光照劑量下皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞中Caspase-3、Caspase-7表達(dá)量的變化;
　　(2)構(gòu)建腫瘤模型:C57BL/7雄鼠（3-4周），飼養(yǎng)于動(dòng)物中心，背部脫毛

3、，A431細(xì)胞消化后，立即用0.9％生理鹽水溶解，皮下注射于背部脫毛區(qū)，地塞米松2ml/d腹部皮下注射，觀察背部腫瘤生長變化，每周記錄一次腫瘤生長情況（腫瘤直徑a與厚度d），8周后切取背部正常皮膚行HE染色，切取腫瘤組織行HE染色及CKpan標(biāo)記;
　　(3)實(shí)驗(yàn)分組:SCC腫瘤體積約64mm3入組(N=20)，實(shí)驗(yàn)組A組（10只）:ALA（濃度20％）+照光組(50J/cm2);B組（3只）:單獨(dú)涂抹ALA組;C組（3只）:單獨(dú)

4、照光組;D組（4只）:不進(jìn)行任何處理，光照時(shí)間均為30min，治療周期為3周，治療前后測量腫瘤的直徑(a)和厚度(d)，計(jì)算腫瘤體積V=ad2/2,單位以毫米(mm)表示。
　　(4)免疫組化:光動(dòng)力治療前及結(jié)束后（一周、兩周、三周）切取各組C57BL/7雄鼠背部腫瘤組織制備石蠟切片，免疫組化法檢測Caspase-3及MMP-9的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　(1)當(dāng)ALA濃度為3.2mmol/L，培養(yǎng)時(shí)間為120min

5、，光照劑量為80J/cm2時(shí)，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測顯示，5-ALA-PDT對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞中Caspase-3和Caspase-7的表達(dá)量的影響最強(qiáng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　(2)ALA濃度為20％，光照劑量為50J/cm2，光照時(shí)間為30min時(shí)，光動(dòng)力治療一周、兩周、三周后，A組即5-ALA-PDT組具有明顯的抑制腫瘤生長的作用，與治療前相比腫瘤體積明顯縮小(P＜0.05)，B、C、D三

6、組沒有抑制腫瘤生長的作用;
　　(3)ALA濃度為20％，光照劑量為50J/cm2，光照時(shí)間為30min時(shí)，光動(dòng)力治療一周、兩周、三周后皮膚鱗狀細(xì)胞癌中Caspase-3的表達(dá)呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)遞增過程，MMP-9的表達(dá)呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)遞減過程，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，對(duì)照組中Caspase-3及MMP-9的表達(dá)變化無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞中Caspase-3

7、和Caspase-7mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量低于Hacat細(xì)胞，推測Caspase-3及Caspase-7等Caspase家族成員與腫瘤的發(fā)生呈負(fù)相關(guān);由5-ALA-PDT處理后不同藥物濃度、光照時(shí)間、光照劑量下A431細(xì)胞中Caspase-3及Caspase-7的差異性動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，推測5-ALA-PDT可能通過誘導(dǎo)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞的凋亡發(fā)揮作用;
　　(2)3次5-ALA-PDT治療能夠有效抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌的生長;