JMJD2B對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)是表皮或皮膚附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖分化而形成的一種皮膚惡性腫瘤，在非黑素性皮膚腫瘤中其發(fā)病率僅次于基底細(xì)胞癌(basal cell carcinoma，BCC)，約占20％。該腫瘤主要發(fā)生于老年人，好發(fā)于頭面部、手背等暴光部位，其轉(zhuǎn)移和惡性程度較低，若發(fā)展較快或轉(zhuǎn)移則預(yù)后較差。近年來(lái)，很多研究發(fā)現(xiàn)UVB、HPV、化學(xué)致癌物、免疫抑制、吸煙、慢性皮膚潰瘍以及燒傷疤

2、痕等是SCC的高危因素，然而對(duì)于SCC的具體發(fā)病機(jī)制目前仍未明確。
　　表觀遺傳是目前腫瘤領(lǐng)域研究中的熱點(diǎn)，它是指在DNA序列未發(fā)生變化的情況下基因的表達(dá)發(fā)生的可遺傳性改變，其主要包括染色質(zhì)重塑、DNA甲基化、組蛋白修飾以及非編碼RNA[7]。組蛋白修飾方式主要取決于其氨基末端的改變，主要包括了氨基末端的泛素化、乙?；⒓谆约傲姿峄?，其中組蛋白甲基化是組蛋白主要的修飾形式之一，它是組蛋白甲基化酶和去甲基化酶動(dòng)態(tài)相互作用的結(jié)果

3、。組蛋白去甲基化酶的主要作用位點(diǎn)是組蛋白H3上的賴(lài)氨酸4、9、27、36殘基。研究表明異常的組蛋白甲基化修飾可導(dǎo)致基因的異常表達(dá)，從而引起包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生。近年來(lái)研究也證實(shí)了組蛋白甲基化與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。JMJD2B是組蛋白去甲基化酶JMJD家族成員之一，它可作用于組蛋白H3上被三甲基化的第9賴(lài)氨酸殘基，使其特異性地去甲基化。以往研究發(fā)現(xiàn)JMJD2家族在胃癌、肺癌、乳腺癌、大腸癌中表達(dá)顯著升高，參與了多種惡性腫

4、瘤的發(fā)生，而該家族與皮膚SCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系目前尚不明確。因此，本課題組欲探討JMJD2B與SCC的關(guān)系，從而為SCC的靶向治療提供新的方向和理論依據(jù)。
　　目的：
　　探討JMJD2B對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響及其參與SCC發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制，為SCC的靶向治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用免疫組化和細(xì)胞免疫熒光的方法檢測(cè)JMJD2B在人皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織及A431細(xì)胞中的表

5、達(dá);
　　2.轉(zhuǎn)染JMJD2B siRNA至A431細(xì)胞株，分別采用CCK-8、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell法檢測(cè)細(xì)胞增殖、克隆、周期分布、凋亡、遷移及侵襲情況;
　　3.采用免疫共沉淀法檢測(cè)JMJD2B與β-catenin、CyclinD1、C-MYC、JUN的相互作用，Western-Blot檢測(cè)JMJD2B和相關(guān)作用蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.JMJD2B在腫瘤組織中的表達(dá)遠(yuǎn)高于正

6、常皮膚，并且能同時(shí)表達(dá)于A431細(xì)胞漿和細(xì)胞核;
　　2.與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較，JMJD2B siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖、克隆、遷移以及侵襲能力顯著受抑，腫瘤細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯，細(xì)胞凋亡能力增加(P＜0.05)，而轉(zhuǎn)染對(duì)照組與未轉(zhuǎn)染組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　3.免疫共沉淀法檢測(cè)到JMJD2B與β-catenin、CyclinD1、JUN間有相互作用，未能檢測(cè)到JMJD2B與C-MYC間的相互作用;Western-Blot

7、檢測(cè)JMJD2B siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞β-catenin、CyclinD1、JUN蛋白表達(dá)顯著降低，而轉(zhuǎn)染對(duì)照組與未轉(zhuǎn)染組間無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論：
　　1.JMJD2B在人皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá);
　　2.JMJD2B siRNA能促進(jìn)A431細(xì)胞的凋亡，同時(shí)也抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖、克隆、遷移以及侵襲的能力以及JMJD2B相關(guān)作用蛋白的表達(dá);
　　3.JMJD2B與β-catenin、CyclinD1、J