靈芝孢子紅景天精華對阿爾茨海默病(AD)患者血漿LDH和Aβ-,42-及血小板線粒體的影響.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種進行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，患者記憶力減退和認知功能障礙，并伴有社會交流和日常生活能力降低。迄今AD的致病因素仍不清楚，認為β-淀粉樣蛋白毒性、氧化應激、線粒體功能失調(diào)、能量代謝障礙等都牽涉到其發(fā)病機制中。目前為止，AD還沒有根治方法，現(xiàn)有的治療方法也很有限。藥用植物及其提取物在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病防治中的作用漸被人們關(guān)注。
　　 文獻報道，紅景天苷具有抗缺氧、清

2、除自由基、抑制細胞Ca2+升高、抑制細胞凋亡的發(fā)生、提高線粒體膜電位、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的作用，許多體外實驗可見很好的保護神經(jīng)細胞線粒體、抗氧化應激、促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元方向分化的作用。破壁靈芝孢子能消除自由基、改善腦部血液循環(huán)、增加腦細胞供氧量、保護神經(jīng)元的作用。本實驗所用的靈芝孢子紅景天精華膠囊主要成分為萌動全破壁靈芝孢子和紅景天苷，我們嘗試將其使用在AD患者身上，觀察認知、智力的改善情況，并初步評價其對病理發(fā)生涉及到的一些因

3、素如線粒體功能、氧化應激等的影響。
　　 基于上述背景，本研究做了如下工作：
　　 第一部分：靈芝孢子紅景天精華對阿爾茨海默病(AD)患者血小板及血漿生化指標的影響
　　 選取廣州市老人院診斷為阿爾茨海默病患者共20例作為研究對象，MMSE評分10～19分，病情中度。在不改變患者的服藥史和生活環(huán)境的情況下，添加口服靈芝孢子紅景天精華膠囊4個月，服藥期間行3次MMSE評分初步觀察患者的病情變化。分別在服藥前1天和服

4、藥完畢后1天各1次采集血液標本并收集于聚丙烯EDTA抗凝管中，低溫運輸和保存，并于2小時內(nèi)進行血小板分離純化及血漿的收集，所有操作均冰上進行。HPLC檢測血小板內(nèi)ATP水平，CM-H2DCFDA高質(zhì)熒光測定法定量血小板內(nèi)ROS水平，比色法測定血小板內(nèi)COX活性，ELISA法檢測血漿Aβ42水平，比色法檢測血漿LDH水平，BCA法定量血小板總蛋白濃度作為參照。血小板內(nèi)ATP水平、COX活性給藥前后自身對照配對t檢驗無統(tǒng)計學意義(P>0.0

5、5)，服藥前后ROS相對熒光強度自身對照配對t檢驗P<0.05，說明服藥后血小板內(nèi)ROS水平較服藥前顯著降低。MMSE評分、血漿中的Aβ42水平和LDH水平經(jīng)前后自身對照配對t檢驗無統(tǒng)計學意義。服用靈芝孢子紅景天精華可降低AD患者血小板內(nèi)ROS水平，提示其具有清除活性氧基團和抗氧化應激的作用。
　　 第二部分：服用靈芝孢子紅景天精華對阿爾茨海默病(AD)血小板內(nèi)線粒體超微形態(tài)的影響
　　 同第一章，選自廣州市老人院病情中

6、度的阿爾茨海默病患者共20例作觀察，從中隨機抽取服藥前、服藥后AD患者各5例以及健康對照5例做透射電鏡觀察血小板線粒體形態(tài)并計量分析。血小板標本采集同第一部分，分離純化末次離心后洗滌液倒去，快速使用戊二醛前固定液固定后常規(guī)電鏡標本制作。正常對照組血小板內(nèi)的線粒體呈圓形或卵圓形，基質(zhì)致密且均勻，嵴分布規(guī)則。服藥前病人血小板內(nèi)大部分的線粒體形態(tài)正常；部分線粒體腫脹，基質(zhì)呈淺灰色、空白或小凝塊狀，嵴少或嵴斷裂。服藥后病人血小板內(nèi)大部分的線粒體

7、較小，其形態(tài)正常；偶見形態(tài)正常、體積較大的線粒體；少許線粒體基質(zhì)呈小凝塊狀，嵴少。線粒體形態(tài)計量結(jié)果行獨立t檢驗，三組別的數(shù)密度Nv、表面積密度Sv比較均無統(tǒng)計學的意義，服藥前組別的比表面δ最小，與正常對照組和服藥后組別比較均有統(tǒng)計學意義。以上的數(shù)據(jù)說明服藥前患者線粒體單位體積有所增大，部分線粒體腫脹變性。服用靈芝孢子紅景天精華后，血小板線粒體超微形態(tài)未見較服藥前有惡化的表現(xiàn)，并可觀察到一些擴大的線粒體。
　　 結(jié)論：服用靈芝孢