氧化鐵磁性納米顆粒介導pHIF-1α-shRNA質粒轉染對耐順鉑肺腺癌影響的體外體內研究.pdf

1、目的：肺癌耐藥成為目前困擾肺癌治療的棘手問題，亦是肺癌生存率一直得不到改善的重要原因之一。近年來，HIF-lα與腫瘤耐藥關聯(lián)倍受關注。本研究構建HIF-lα-shRNA重組質粒，應用新近發(fā)展的pll-DCIONP作載體，與常用的脂質體載體比較，轉染耐順鉑肺腺癌，分析pll-DCIONP介導轉染細胞可行性同時，從體外體內兩個層面研究pHIF-lα-shRNA轉染對耐順鉑肺腺癌細胞及其移植瘤生長與耐順鉑的影響，并初步探討其可能的機制。

2、 方法：1.針對HIF-lα設計RNA干擾作用靶點，構建pHIF-lα-shRNA重組質粒，半定量RT-PCR法分析pll-DCIONP及脂質體介導質粒轉染A549/DDP細胞后HIF-lα、耐藥蛋白MRP及LRP的mRNA的表達，細胞免疫化學法分析HIF-lα、MRP及LRP的蛋白表達，MTT法計算順鉑作用下不同組細胞的死亡率。2.建立移植瘤裸鼠動物模型，在外加磁場作用下，pll-DCIONP介導pHIF-lα-shRNA轉染尾靜脈

3、注射裸鼠，觀察記錄裸鼠體重及移植瘤體積變化，計算腫瘤生長指數(shù)，HE染色觀察處理后裸鼠肝腎組織病理，免疫組織化學法分析腫瘤組織HIF-lα、MRP及LRP的蛋白表達 結果：1.成功構建了針對HIF-lα設計的pHIF-lα-shRNA質粒，pll-DCIONP介導轉染相對效率高于脂質體介導（P<0.01）；2.pHIF-lα-shRNA質粒轉染A549/DDP細胞后，HIF-lαmRNA及蛋白表達和MRP、LRPmRNA及蛋白表達

4、均下降，pll-DCIONP介導組大于脂質體組（P<0.01）； HIF-lα mRNA及蛋白表達下調與MRP、LRPmRNA及蛋白表達的下調顯著相關（r=0.900，0.915 P<0.01）、（r=0.901，0.896 P<0.01）；3.轉染后A549/DDP細胞對順鉑的耐藥性降低（P<0.05）；4.成功建立裸鼠耐順鉑肺腺癌移植瘤動物模型，pll-DCIONP介導pHIF-lα-shRNA在外加磁場引導下靶向作用于移植瘤后，以

5、腫瘤生長指數(shù)作為評價指標，單純質粒轉染組與對照組相比，腫瘤生長受抑制，質粒轉染聯(lián)合順鉑治療組與單純質粒轉染組和單純順鉑治療組相比，腫瘤生長明顯受抑制（P<0.01），其中pll-DCIONP介導組作用明顯強于脂質體介導組（P<0.01）；5.靶向作用后腫瘤組織HIF-lα蛋白表達下降，同時耐藥相關蛋白MRP，LRP蛋白表達下降，pll-DCIONP介導組作用大于脂質體組（P<0.01），HIF-lα蛋白表達下調與MRP、LRP蛋白表達的

6、下調顯著相關（r=0.918，0.906P<0.01）；6.pll-DCIONP介導pHIF-lα-shRNA轉染治療荷瘤裸鼠的肝、腎組織無明顯病理改變。 結論：1.成功構建了HIF-1α-shRNA質粒，pll-DCIONP介導相對轉染效率高于脂質體介導。2.pHIF-1α-shRNA轉染后，A549/DDP細胞HIF-lα mRNA及蛋白的表達明顯下調，并可能通過某種機制使得MRP、LRP mRNA及蛋白的表達下調，從而提高