臨床分離銅綠假單胞菌多重耐藥株外排泵機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究銅綠假單胞菌臨床分離耐藥株中的多重藥物外排泵(以MexA-MexB-OprM為例)的耐藥機(jī)制.探討在臨床中分離的多重耐藥銅綠假單胞菌菌株是否存在MexA-MexB-OprM外排泵表達(dá)的增強(qiáng)及其調(diào)節(jié)基因mexR的突變.方法:收集來自臨床送檢標(biāo)本的銅綠假單胞菌多重耐藥株13株和對常用抗菌藥物敏感菌5株.質(zhì)控菌株ATCC27853.進(jìn)行常規(guī)分離再鑒定.采用K-B紙片法檢測上述細(xì)菌對16種抗菌藥物的藥敏情況.分別采用標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法和頭

2、孢西丁三維試驗檢測ESBLs和AmpC酶.提取細(xì)菌的外膜蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析,比較外膜蛋白OprM表達(dá)的差異.并進(jìn)一步提取多重耐藥菌株的染色體DNA,PCR反應(yīng)擴(kuò)增MexA-MexB-OprM外排泵的調(diào)節(jié)基因mexR,對產(chǎn)物進(jìn)行測序,分析突變情況.結(jié)果:1.所收集的13株臨床多重耐藥株的耐藥表型與多重藥物外排泵MexA-MexB-OprM表達(dá)增強(qiáng)菌株的耐藥表型基本一致.所收集的5株臨床敏感菌對所測抗生素全部敏感.2.所收集的13

3、株臨床多重耐藥株均未檢測到ESBLs和AmpC酶.3.銅綠假單胞菌的外膜蛋白SDS-PAGE分析顯示多重耐藥菌株較完全敏感菌株和質(zhì)控菌株在49kDa處的條帶表達(dá)明顯增強(qiáng).4.13株多重耐藥菌株的mexR基因序列分析結(jié)果顯示存在編碼基因的點(diǎn)突變,共存在4個位置的堿基置換,其中兩個引起編碼氨基酸的改變.結(jié)論:1.13株臨床分離銅綠假單胞菌多重耐藥株存在MexA-MexB-OprM的外膜蛋白成分OprM的表達(dá)增強(qiáng),提示有該外排泵耐藥機(jī)制的存在