轉(zhuǎn)錄水平研究PLZF-RARα TM的發(fā)病機(jī)制及RARα-PLZF TM的建立.pdf

1、研究PLZH-RARα、RARα-PLZF以及PLZF-RARα-PLZFTM不僅有助于進(jìn)一步加深對APL發(fā)病機(jī)制、維甲酸誘導(dǎo)分化的了解,而且對于徹底揭示CML的發(fā)病機(jī)制、APL與CML的內(nèi)在聯(lián)系以及理解其他髓系白血病等多個(gè)方面都具有重要的意義.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型是研究基因功能和基因問相互作用的重要手段.我們在血研所原有研究的基礎(chǔ)之上,利用SPF(Speceficpathogen-free,無特定病原體)級小鼠重新建立了PLZF-RARαT

2、M模型.通過針對PLZF-RARα基因融合部位和載體片段的DNA-PCR及Southern blot鑒定了整合有PLZH-RARα的轉(zhuǎn)基因小鼠,用巢式RT-PCR檢測到發(fā)病小鼠骨髓中PLZF-RARα的表達(dá).經(jīng)過對該轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行仔細(xì)地觀察,我們發(fā)現(xiàn)其外周血象、骨髓細(xì)胞形態(tài)分類以及脾臟變化等方面均與CML類似.該小鼠的骨髓、脾臟、肝臟病理學(xué)改變以及骨髓和脾臟的造血細(xì)胞表面抗原的表達(dá)變化也符合CML的特性.為了從全基因組水平了解PLZF-

3、RARα在轉(zhuǎn)基因小鼠造血細(xì)胞中引起的基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的變化,我們以發(fā)病小鼠的骨髓細(xì)胞為樣本、以陰性同胞的骨髓細(xì)胞為對照,利用含有8722個(gè)基因的cDNA陣列,在該研究所已有的技術(shù)平臺上進(jìn)行了表達(dá)譜的分析.為了更加全面地研究t(11;17)(q23;q21)染色體易位在APL細(xì)胞中的作用機(jī)制,我們構(gòu)建了hCG-RARa-PLZF轉(zhuǎn)基因載體,并利用SPF級小鼠初步建立了RARα-PLZF轉(zhuǎn)基因小鼠模型.通過DNA-PCR、Southernblo