三角帆蚌凝集素和C1qDC蛋白在先天免疫中的功能研究.pdf

1、貝類是重要的水產養(yǎng)殖動物，可創(chuàng)造出巨大的經濟價值。然而，近年來病害的頻繁侵襲使水產養(yǎng)殖業(yè)遭受了巨大的經濟損失，為了預防和控制貝類水產養(yǎng)殖病害的發(fā)生，深入研究其免疫防御機制是很有必要的，尤其是對病原識別機制的研究。C-型凝集素和C1qDC蛋白是重要的病原識別分子，但目前對于其功能的研究還很少。為了闡明他們在抵制病原入侵過程中的作用，以及他們是否具有特異性，我們用軟體動物對其相關功能做了一些研究。本研究選取三角帆蚌作為實驗動物，研究C-型凝

2、集素和含C1q結構域蛋白在其免疫防御中的作用。
　　1、三角帆蚌C-型凝集素（HcLec4）作為模式識別受體參與抗細菌免疫反應
　　在無脊椎動物中已有報道，許多C-型凝集素(CTL)參與了先天免疫反應，如多酚氧化酶的激活，細胞的黏附，細菌清除和吞噬作用，以往的研究主要集中在C-型凝集素糖識別結構域(CRDs)功能方面。目前，對三角帆蚌C-型凝集素CRD結構域功能方面的研究還很少。本研究以三角帆蚌作為實驗動物，從三角帆蚌克隆得

3、到一個含有四個CRD結構域的凝集素基因，命名為HcLec4，該基因四個CRD結構域被分別命名為CRD1、CRD2、CRD3和CRD4，并對該HcLec4基因在先天免疫中的功能進行了初步的研究。運用RACE技術得到該基因cDNA序列的全長，為2218bp，擁有一個1860bp的開放閱讀框，編碼620個氨基酸。多序列比對和系統(tǒng)進化樹分析顯示，該基因的四個CRD蛋白彼此之間有所不同。在mRNA水平上，HcLec4廣泛分布于三角帆蚌被檢測的組織

4、中，包括血細胞、肝胰腺、鰓、外套膜和斧足，并在肝胰腺中具有相對較高的表達水平。HcLec4基因在肝胰腺組織中，受金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和副溶血弧菌感染后，其在感染初期(2h)表達量顯著下調。我們進一步分析了HcLec4基因四個CRD結構域的細菌結合和糖結合活性，結果顯示，四個CRD結構域能與多種細菌、脂多糖(LPS)和肽聚糖(PGN)結合。沉默HcLec4基因后，其細菌清除能力提高，抗菌肽（AMPS）表達水平上調。綜上所

5、有實驗結果表明，HcLec4基因可能在細菌感染早期通過調節(jié)抗菌肽的表達發(fā)揮抗菌作用。
　　2、三角帆蚌HcC1qDC基因作為模式識別受體參與抗細菌免疫應答反應
　　C1q是補體C1復合物的關鍵部件，這部分包含有一個球狀C1q(gC1q)結構域，此結構域具有顯著的配體結合特性。C1q結構域包含蛋白(C1qDC)由一個gC1q域組成，在無脊椎動物中存在許多能夠識別非自我配體的C1qDC蛋白。本研究我們從三角帆蚌中鑒定出四個HcC

6、1qDC基因，即HcC1qDC1-HcC1qDC4。HcC1qDC1-HcC1qDC4分別編碼224、204、305和332個氨基酸。HcC1qDC1-HcC1qDC3基因序列的C末端含有一個gC1q域，HcC1qDC4基因序列中除了有一個gC1q域之外，還有一個卷曲螺旋區(qū)。多序列比對和系統(tǒng)進化樹分析顯示，四個HcC1qDC基因與來自軟體動物的C1qDC基因具有高度的同源性。組織分布結果顯示，HcC1qDC1-HcC1qDC4廣泛分布于