三角帆蚌肽聚糖識(shí)別蛋白S和L基因cDNA全長(zhǎng)克隆及組織表達(dá)分析.pdf

1、模式識(shí)別受體(Pattern recognition receptors,PRRs)是識(shí)別微生物表面病原體相關(guān)分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)的一類(lèi)先天免疫分子，肽聚糖識(shí)別蛋白(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)家族是PRRs一員可識(shí)別細(xì)菌肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)。PGRPs在無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中高度

2、保守，如軟體動(dòng)物。本研究采用5′、3′RACE技術(shù)，對(duì)高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序所得三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)PGRP-S(hcPGRP-S)和PGRP-L(hcPGRP-L)基因部分片段分別進(jìn)行了5′、3′末端克隆，經(jīng)拼接得到hcPGRP-S和hcPGRP-L cDNA序列全長(zhǎng)，并采用實(shí)時(shí)熒光相對(duì)定量(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)了其組織表達(dá)分布，及經(jīng)肽聚糖和脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)刺激后在肝胰

3、腺中的表達(dá)變化。
　　hcPGRP-S基因cDNA全長(zhǎng)1438 bp，開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)858 bp，編碼285氨基酸(aa)，預(yù)測(cè)分子量大小為32.3 ku，理論等點(diǎn)為7.98，無(wú)信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)。與其他物種PGRPs氨基酸序列多重比對(duì)發(fā)現(xiàn)，hcPGRP-S氨基酸序列與夏威夷短尾魷魚(yú)PGRP4同源性最高(51％)，而與牛PGLYRP3同源性最低(33%)。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，hcPGRP-S在性腺、肝胰腺、鰓、心臟及外套膜均有

4、表達(dá)，性腺中表達(dá)水平最高。經(jīng)PGN或LPS注射刺激后，肝胰腺中hcPGRP-S表達(dá)水平顯著上調(diào)，表明hcPGRP-S可能在三角帆蚌的肝胰腺抗菌免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。
　　hcPGRP-L基因cDNA序列全長(zhǎng)1716 bp，開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1263 bp，編碼420 aa，預(yù)測(cè)蛋白分子量大小為48.24 ku，理論等電點(diǎn)為8.58，預(yù)測(cè)有4個(gè)潛在N-糖基化位點(diǎn)，分別為N67QT、N99KS、N193LT和N229SS，有PGRP結(jié)構(gòu)域