涼血活血方對(duì)大鼠放射性肺損傷的防治作用及量效關(guān)系研究.pdf

1、目的： 通過觀察多次重復(fù)照射之大鼠放射性肺損傷的組織學(xué)改變和細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)變化，評(píng)價(jià)不同劑量涼血活血方對(duì)放射性肺損傷的早期防治作用及其量效關(guān)系，為進(jìn)一步研發(fā)防治放射性肺損傷中藥新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 取72只Wistar大鼠，隨機(jī)分為單純照射組(A組)、涼血活血方小劑量組(B組，9g/kg·d)、涼血活血方中劑量組(C組，18g/kg·d)和涼血活血方大劑量組(D組，36g/kg·d)，每組18只。中藥湯劑由

2、生地、川芎、丹皮、桃仁、莪術(shù)、連翹、地龍組成，通過加熱濃縮成生藥2.0g/ml，3個(gè)中藥治療組分別按成人(按60公斤計(jì)算)每公斤體重劑量的5、10、20倍計(jì)算給藥量，于照射前1周開始用灌胃法給藥，每同1次。每周根據(jù)體重變化調(diào)整給藥量。單純照射組給予2ml生理鹽水灌胃。各組大鼠給予每次3Gy照射，每周2次，共10次。觀察大鼠精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)量、分泌物及大便等一般狀況。各組在完成10次照射后，以及在開始照射后第12周和第26周時(shí)，隨機(jī)抽

3、取6只大鼠處死，取受照射肺進(jìn)行大體中醫(yī)證候?qū)W觀察，并對(duì)標(biāo)本處理后，切片采用HE染色觀察肺臟組織學(xué)變化；通過免疫組織化學(xué)染色，應(yīng)用Image pro plus5.0軟件測(cè)定IL-6、TGF-β、TNF-α、bFGF陽(yáng)性面積的表達(dá)。采用CHISS(奇思)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，通過比較各組大鼠一般情況、活體標(biāo)本觀察、病理組織學(xué)變化及細(xì)胞因子表達(dá)，評(píng)價(jià)中藥的治療作用及其對(duì)中醫(yī)證候特點(diǎn)的影響，并評(píng)價(jià)量效關(guān)系。 結(jié)果：

4、 1、動(dòng)物活體觀察發(fā)現(xiàn)，單純照射組大鼠與各中藥治療組相比，精神萎靡、進(jìn)食量、活動(dòng)量減少等表現(xiàn)出現(xiàn)較早，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，鼻周紅赤、眼睛黃色分泌物、大便干硬等發(fā)生率較高；大、中劑量組大鼠精神狀態(tài)、進(jìn)食量、活動(dòng)量與小劑量組無差別，但鼻周紅赤、大便干硬等發(fā)生率低于小劑量組。 2、大體標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn)，單純照射組大鼠于照射第5周時(shí)見肺臟腫脹、表面鮮紅，并有暗紅色斑片狀出血；第12周時(shí)肺腫脹減退，表面瘀斑顏色轉(zhuǎn)暗；第26周時(shí)其肺臟體積縮小、質(zhì)

5、地變硬，可見蒼白實(shí)變?cè)睢Ｖ兴幮┝拷M第5周時(shí)肺臟表面見多個(gè)暗紅色點(diǎn)狀出血；第12周時(shí)肺臟表面少量暗紅色瘀點(diǎn)；第26周時(shí)肺臟體積縮小不明顯，可見瘀斑，蒼白實(shí)變?cè)钶^小。中劑量、大劑量組第5周時(shí)肺臟表面腫脹不明顯，見散在出血點(diǎn)；第12周時(shí)見散在暗紅色瘀點(diǎn)；第26周時(shí)肺臟體積無縮小，質(zhì)地正常，未見明顯瘀斑及蒼白實(shí)變?cè)睢?3、肺組織病理鏡下觀察表明，單純照射組第5周時(shí)肺組織病變表現(xiàn)為肺間質(zhì)充血、出血、水腫明顯，肺泡結(jié)構(gòu)破壞；第12周時(shí)急性

6、炎癥消退，肺泡間質(zhì)增厚，肺泡腔變小，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；第26周時(shí)見肺泡間質(zhì)重度增厚，肺泡腔明顯萎陷乃至消失，纖維細(xì)胞明顯增多。各中藥組第5周時(shí)隨劑量增加，肺間質(zhì)充血、出血、水腫及肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度逐漸減輕；第12周時(shí)肺間質(zhì)增厚不明顯；第26周時(shí)，大、中劑量組肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度明顯減輕，纖維細(xì)胞較少。大、中劑量?jī)山M間無明顯差別。 4、從免疫組化染色結(jié)果看，單純照射組大鼠肺組織TNF-α、IL-6在第5周時(shí)達(dá)到高峰，而TGF-β、bFG

7、F分別在第12周和第26周時(shí)表達(dá)最強(qiáng)；中藥各劑量組在第5周時(shí)明顯抑制了TNF-α和IL-6的表達(dá)高峰，大、中劑量組效果更為明顯；TGF-β在各時(shí)相的表達(dá)明顯低于單純對(duì)照組(P<0.01)；中藥各劑量組bFGF的表達(dá)未見明顯高峰，而大劑量組在第26周時(shí)對(duì)bFGF表達(dá)的抑制程度最明顯。大、中劑量組之間對(duì)TNF-α、IL-6、TGF-β表達(dá)的影響無差別(P>0.05)。 結(jié)論： 1、大鼠受照射后出現(xiàn)精神萎靡、進(jìn)食量、活動(dòng)量減少

8、、鼻周紅赤、眼睛黃色分泌物、大便干硬，肺臟表面腫脹、出血、瘀斑等表現(xiàn)與中醫(yī)“熱毒內(nèi)盛”及“熱傷肺絡(luò)”證相符，早期應(yīng)用涼血活血方能減輕大鼠“熱毒內(nèi)盛”、“熱傷肺絡(luò)”證的表現(xiàn)；后期各組大鼠一般狀況基本正常，但中藥各劑量組活體肺標(biāo)本表面瘀斑及蒼白實(shí)變?cè)蠲黠@小于單純對(duì)照組，說明涼血活血方能減輕大鼠后期“瘀阻肺絡(luò)”證的程度。 2、早期應(yīng)用涼血活血方能減輕大鼠活體肺組織表面腫脹、出血，鏡下觀察肺間質(zhì)充血、出血、水腫及腫泡結(jié)構(gòu)破壞程度均較輕，

9、涼血活血方具有預(yù)防和減輕急性放射性肺炎的效果；后期鏡下觀察見肺間質(zhì)增厚不明顯、肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度較輕、纖維細(xì)胞較少，涼血活血方能減輕放射性肺纖維化的程度。 3、涼血活血方在早期可明顯抑制TNF-α、IL-6的表達(dá)，而在后期對(duì)TGF-β和bFGF表達(dá)的抑制更明顯，這可能是其減輕早期放射性肺損傷炎癥反應(yīng)，減輕和延緩放射性肺纖維化的進(jìn)展，從而達(dá)到早期防治放射性肺損傷效果的機(jī)制。而涼血活血方能減輕放射性肺纖維化程度，可能與其減輕早期急性炎