蛋白水解應激及蛋白質質量控制系統(tǒng)在多巴胺能神經元選擇性變性死亡中的研究.pdf_第1頁
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1、華中科技大學博士學位論文蛋白水解應激及蛋白質質量控制系統(tǒng)在多巴胺能神經元選擇性變性死亡中的研究姓名:王嵐申請學位級別:博士專業(yè):神經病學指導教師:孫圣剛20070519華中科技大學博士學位論文6synuclein蛋白聚集過程中為一重要調節(jié)因素?!娟P鍵詞】α突觸核蛋白;氧化應激;多巴胺;帕金森病第二節(jié):環(huán)境毒素對泛素蛋白酶體損傷的研究目的探討環(huán)境毒素導致泛素蛋白酶體損傷,誘發(fā)蛋白水解應激在多巴胺能神經元變性死亡中的作用。方法6OHDA、M

2、PP、魚藤酮及泛素蛋白酶體抑制劑Lactacystin作用于NGF誘導的PC12細胞,熒光分光光度計測量各組細胞蛋白酶體中各蛋白水解酶活性的變化。免疫印跡方法檢測各藥物處理組PC12細胞內泛素化蛋白的水平。應用共聚焦免疫熒光雙標染色觀察Lactacystin處理后PC12細胞內αsynuclein及泛素的表達及蛋白聚集現(xiàn)象。結果熒光底物酶活性測定提示MPP75m、魚藤酮20nM處理使胰蛋白酶,糜蛋白酶及PgH水解酶活性明顯下降(P0.0

3、5)6OHDA200M則誘導三種蛋白酶活性進一步下降,熒光指數(shù)分別為7.230.58,79.62.73和4.230.49(正常組為13.91.75,99.35.23和6.900.60,P<0.05)。免疫印跡結果證實對照組細胞內未檢測到相對高分子質量的泛素化蛋白質,在各神經誘變劑處理后,細胞內相對高分子質量泛素化蛋白質的含量顯著增高。免疫熒光染色顯示Lactacystin作用24h后胞漿內αsynuclein及泛素化蛋白表達增強,并可見

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