PC12細(xì)胞、穩(wěn)定表達(dá)TrkA的Cos-7細(xì)胞在神經(jīng)生長(zhǎng)因子刺激下的蛋白質(zhì)組學(xué)研究及褪黑素對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分穩(wěn)定表達(dá)TrkA的Cos-7細(xì)胞株在NGF刺激下的蛋白質(zhì)組學(xué)研究目的:通過(guò)NGF刺激穩(wěn)定表達(dá)TrkA的Cos-7細(xì)胞株,建立一種人工神經(jīng)細(xì)胞分化的人工模型,尋找與神經(jīng)細(xì)胞分化相關(guān)的蛋白質(zhì).方法:用50ng/ml的NGF刺激穩(wěn)定表達(dá)TrkA的Cos-7細(xì)胞株,觀察0,1,3,5天的形態(tài)學(xué)變化;免疫組織化學(xué)檢測(cè)Cos-7細(xì)胞MAP-2蛋白質(zhì)的表達(dá);經(jīng)Western blot方法用4G10抗體檢測(cè)酪氨酸磷酸化蛋白;雙向電泳比較分化前后

2、Cos-7細(xì)胞全裂解液的蛋白質(zhì)變化.結(jié)論:人工模型Cos-7細(xì)胞可用于研究神經(jīng)細(xì)胞分化的機(jī)制,有70個(gè)蛋白可能參與了Cos-7細(xì)胞的分化過(guò)程,32個(gè)蛋白在NGF刺激后含量升高5倍以上,38個(gè)蛋白在NGF刺激后含量降低5倍以上.第二部分PC12細(xì)胞在NGF刺激下分化前后的蛋白質(zhì)組學(xué)研究;目的:尋找與PC12細(xì)胞株神經(jīng)細(xì)胞分化相關(guān)的蛋白質(zhì).方法:利用雙向電泳技術(shù),對(duì)比50ng/ml濃度下NGF刺激3天后分化良好的PC12細(xì)胞與未分化的PC1

3、2細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)的不同.結(jié)論:116個(gè)蛋白質(zhì)可能參與了PC12細(xì)胞株的神經(jīng)分化過(guò)程.第三部分褪黑素對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用;目的:觀察褪黑素對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠胚胎中腦多巴胺能神經(jīng)元存活率的影響.方法:取孕齡14天大鼠胚胎中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng),加入10<'-10>—10<'-5>M的褪黑素,24小時(shí)后觀察存活細(xì)胞數(shù).結(jié)果:在褪黑素濃度為10<'-5>—10<'-8>M時(shí),存活細(xì)胞數(shù)明顯多于對(duì)照組,差異具有顯著性.結(jié)論:褪黑素對(duì)多