PC12細胞、穩(wěn)定表達TrkA的Cos-7細胞在神經(jīng)生長因子刺激下的蛋白質(zhì)組學研究及褪黑素對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用.pdf

1、第一部分穩(wěn)定表達TrkA的Cos-7細胞株在NGF刺激下的蛋白質(zhì)組學研究目的:通過NGF刺激穩(wěn)定表達TrkA的Cos-7細胞株,建立一種人工神經(jīng)細胞分化的人工模型,尋找與神經(jīng)細胞分化相關(guān)的蛋白質(zhì).方法:用50ng/ml的NGF刺激穩(wěn)定表達TrkA的Cos-7細胞株,觀察0,1,3,5天的形態(tài)學變化;免疫組織化學檢測Cos-7細胞MAP-2蛋白質(zhì)的表達;經(jīng)Western blot方法用4G10抗體檢測酪氨酸磷酸化蛋白;雙向電泳比較分化前后

2、Cos-7細胞全裂解液的蛋白質(zhì)變化.結(jié)論:人工模型Cos-7細胞可用于研究神經(jīng)細胞分化的機制,有70個蛋白可能參與了Cos-7細胞的分化過程,32個蛋白在NGF刺激后含量升高5倍以上,38個蛋白在NGF刺激后含量降低5倍以上.第二部分PC12細胞在NGF刺激下分化前后的蛋白質(zhì)組學研究;目的:尋找與PC12細胞株神經(jīng)細胞分化相關(guān)的蛋白質(zhì).方法:利用雙向電泳技術(shù),對比50ng/ml濃度下NGF刺激3天后分化良好的PC12細胞與未分化的PC1

3、2細胞蛋白質(zhì)表達的不同.結(jié)論:116個蛋白質(zhì)可能參與了PC12細胞株的神經(jīng)分化過程.第三部分褪黑素對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用;目的:觀察褪黑素對體外培養(yǎng)的大鼠胚胎中腦多巴胺能神經(jīng)元存活率的影響.方法:取孕齡14天大鼠胚胎中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞體外培養(yǎng),加入10<'-10>—10<'-5>M的褪黑素,24小時后觀察存活細胞數(shù).結(jié)果:在褪黑素濃度為10<'-5>—10<'-8>M時,存活細胞數(shù)明顯多于對照組,差異具有顯著性.結(jié)論:褪黑素對多