高頻電刺激對PC12類神經細胞形態(tài)結構及功能的影響.pdf

1、目的：研究細胞外高頻電刺激（high frequency stimulation，HFS）對PC12類交感神經細胞的形態(tài)結構及細胞內Ca2+、cPKC和自身P-PKC的影響，為深入探討細胞內Ca2+影響TH的表達提供相關實驗數(shù)據(jù)。 方法：將HFS作用于傳代PC12類交感神經細胞株，HFS參數(shù)為：刺激頻率130 Hz，通過電流500 μA，脈沖寬度60 μs；每天固定時間刺激3 h，持續(xù)3 d。對照組HFS為零。分別用H E染色、

2、免疫組織化學方法檢測經HFS后PC12類交感神經細胞在光鏡下形態(tài)結構的變化；應用激光共聚焦掃描顯微鏡觀測即刻HFS前后以及連續(xù)3 d HFS停止前后單個PC12類神經活細胞內Ca2+動態(tài)變化，并通過L型電壓敏感鈣通道阻滯劑尼非地平（nifedipine，NIF）以證實HFS可引起PC12類神經細胞內Ca2+變化；通過Western Blot方法檢測HFS后，NIF對經典蛋白激酶C（conventional protein kinase

3、C，cPKC）及其自身磷酸化蛋白激酶C（Phospho-PKC（βII)，P-PKC）在PC12類神經細胞內表達的影響。 結果：與對照組比較，HFS后PC12類神經細胞光鏡下突起長度顯著縮短，突起個數(shù)明顯減少（P<0.01）；免疫組織化學結果顯示，HFS后PC12類神經細胞胞質灰度降低，提示酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)代謝水平在HFS后有顯著下降（P<0.01）。激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察到，與

4、HFS前比較，HFS后，即刻觀察到胞內Ca2+熒光強度迅速降低，經線掃描和面掃描顯示降低幅度分別達47.7 ％和2.1 ％；連續(xù)刺激3 d，每天3 h，停止刺激后，胞內Ca2+熒光強度迅速增強，增強幅度分別達60 ％和3.5 ％。該作用被L型電壓敏感鈣通道阻滯劑NIF（終濃度2 μM）減弱。與對照組比較，連續(xù)3 d刺激組，細胞內cPKC及P-PKC含量明顯增加，而經NIF（終濃度2 μM）處理的連續(xù)3 d刺激組，細胞內cPKC及P-PK

5、C含量無明顯變化。 結論： 1. HFS對PC12類交感神經細胞有抑制作用，它抑制PC12類交感神經細胞的軸突生長及降低分泌顆粒的代謝水平。 2. HFS誘導細胞內Ca2+經L型鈣通道釋放，對PC12類神經細胞內第二信使調節(jié)有顯著影響，而L型電壓敏感鈣通道阻滯劑NIF能降低HFS對PC12類神經細胞的抑制作用，但并非完全抑制。 3. HFS可增強PC12細胞內cPKC及P-PKC的表達，而這種現(xiàn)象可被NI