天麻酚性成分對PC12細胞及胎鼠皮層神經(jīng)元OGD-R損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：采用PC12細胞缺糖缺氧/復糖復氧（oxygen-glucose deprivation and reintroduction，OGD/R）損傷模型對從天麻中分離的15個酚性成分進行活性篩選，再將具有活性的成分作用于胎鼠皮層神經(jīng)元OGD/R損傷模型進行確證，并探討可能的作用機制。
　　 方法：⑴采用含Na2S2O4的無糖Earle's液造成PC12細胞缺糖缺氧，然后換正常培養(yǎng)基復糖復氧，以細胞形態(tài)變化和細胞存活率（MTT法

2、）作為評價指標，篩選出天麻15個酚性成分中能夠提高細胞存活率的活性成分。⑵取妊娠18～19天大鼠的胎鼠，采用神經(jīng)細胞原代分離技術，獲取胎鼠皮層神經(jīng)元，復制OGD/R模型，于倒置顯微鏡下觀察活性成分對OGD/R損傷皮層神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構的影響。采用MTT法檢測活性成分對OGD/R損傷皮層神經(jīng)元存活率的影響。⑶用乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒檢測神經(jīng)元內(nèi)外LDH的活性，計算LDH漏出率，評價活性成分對模型神經(jīng)元細胞膜的影響。⑷采用Fura-2/AM

3、熒光探針檢測神經(jīng)細胞內(nèi)游離鈣濃度([Ca2+]i)的變化，探討活性成分是否具有抗神經(jīng)細胞內(nèi)鈣超載的作用。
　　 結(jié)果：①天麻各酚性成分對PC12細胞OGD/R損傷模型表現(xiàn)出不同的作用。部分酚性成分能夠不同程度減輕模型細胞的形態(tài)結(jié)構受損;通過MTT法對細胞相對活性的檢測顯示，能提高模型細胞活性的成分為:1#、3#、4#、8#、11#、13#，具有抑制作用的成分為:2#、5#、6#、9#;低劑量能提高而高劑量能抑制細胞活性的成分為:

4、7#、12#、14#;對細胞活性既無提高也無抑制作用的成分為:10#、15#。②皮層神經(jīng)元在OGD/R損傷后，胞體折光度下降，突觸回縮甚至斷裂，最終細胞圓縮，脫落，模型組存活細胞明顯減少;而給予尼莫地平、天麻活性成分后，細胞形態(tài)結(jié)構受損減輕。③通過MTT法對皮層神經(jīng)元相對活性的檢測顯示:與模型組比較，尼莫地平2.5、5μg/ml能顯著提高神經(jīng)元的存活率（P＜0.01），成分8#、11#、12#能顯著提高神經(jīng)元的存活率（P＜0.05;P＜

5、0.01），其他成分提高神經(jīng)元存活率的作用較弱。④神經(jīng)元經(jīng)過OGD/R損傷后LDH漏出率明顯升高(P＜0.01)，與模型組比較，天麻活性成分8#、11#、12#均能不同程度降低OGD/R皮層神經(jīng)元LDH漏出率（P＜0.05;P＜0.01）。⑤與正常組比較，模型組神經(jīng)元內(nèi)[Ca2+]i顯著增加（P＜0.01），與模型組比較，尼莫地平2.5μg/ml和5μg/ml、8#12.5μg/ml、11#25μg/ml和50μg/ml、12#6.25