丹紅注射液對(duì)體外培養(yǎng)胎鼠神經(jīng)元NMDA損傷后的神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、背景：神經(jīng)保護(hù)治療是急性腦缺血等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究熱點(diǎn)之一。中藥治療是國(guó)內(nèi)急性腦缺血常用治療手段,具有巨大潛力。近年來(lái),多項(xiàng)臨床研究及腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ腕w內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,丹紅注射液對(duì)急性腦缺血治療有效。體外實(shí)驗(yàn)主要集中在丹紅注射液對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用方面,尚少見丹紅注射液對(duì)于體外培養(yǎng)神經(jīng)元模擬缺血損傷后是否具有神經(jīng)保護(hù)作用的報(bào)道。由N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體介導(dǎo)的損傷途徑是興奮性氨基酸神經(jīng)毒

2、性作用的主要通路之一,可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
　　 目的：以NMDA誘導(dǎo)體外培養(yǎng)胎鼠皮層神經(jīng)元的興奮性毒性損傷,研究丹紅注射液對(duì)于神經(jīng)元NMDA損傷后是否具有保護(hù)作用。為進(jìn)一步的研究包括分析該藥有效成分并闡明其具體的保護(hù)機(jī)制等打下基礎(chǔ)。
　　 方法：采用孕17-18天的KM孕小鼠,以神經(jīng)元完全培養(yǎng)液進(jìn)行胎鼠原代皮層神經(jīng)元培養(yǎng)。通過(guò)神經(jīng)元微管相關(guān)蛋白(Microtubule-associated protein-2,MAP-2)

3、染色進(jìn)行神經(jīng)元鑒定。神經(jīng)元培養(yǎng)至10d時(shí),隨機(jī)分為3組,分別加入濃度為50umol/1、150umol/1及300umol/1的NMDA,根據(jù)噻唑蘭(methyl-thiazole-tetrazolium,MTT)法細(xì)胞生存率檢測(cè)及乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)釋放率測(cè)定結(jié)果,選取3組中神經(jīng)元損傷最明顯的一組,以該組NMDA濃度建立NMDA損傷模型。將培養(yǎng)的神經(jīng)元隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組、NMDA損傷組、

4、丹紅給藥組。正常對(duì)照組按原神經(jīng)元培養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)。NMDA損傷組按上述方法建立NMDA損傷模型。丹紅給藥組分別在加入NMDA后即刻給予0.005μl/ml及0.01μl/ml的丹紅注射液治療。以MTT法檢測(cè)細(xì)胞生存率,LDH釋放率測(cè)定細(xì)胞損傷,通過(guò)Hoechst及TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：NMDA損傷后神經(jīng)元腫脹、軸突斷裂。隨著NMDA濃度的增高,細(xì)胞生存率依次下降,LDH釋放率依次增加,以NMDA 300u