利用MALDI-TOF-TOF質譜分析膽囊結石中非粘性蛋白的組成.pdf

1、目的：探討膽固醇結石和膽色素結石結中是否存在非粘性蛋白質并鑒定蛋白質的組成。
　　方法：取30例經(jīng)保膽取石術的患者的膽囊結石，其中男11例，女19例。通過肉眼觀察和甘油三酯法測定膽固醇含量結合的方法對膽囊結石進行分類。將膽固醇含量≥70％歸為膽固醇型結石，將膽固醇含量≤30%歸為膽色素型結石，其中20例膽固醇型和10例膽色素型。應用組織裂解法（RIPA）分別提取膽固醇結石和膽色素結石的蛋白質，蛋白質變性后十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝

2、膠（SDS-PAGE）電泳分離膽固醇結石和膽色素型結石的蛋白質，蛋白質經(jīng)考馬斯亮藍和銀染后切取蛋白質條帶經(jīng)酶解脫鹽，然后利用基質輔助激光解析電離飛行時間串聯(lián)（MALDI-TOF-TOF）質譜對這些蛋白進行鑒定。通過DAVID工具對上述基因進行基因本體（GO）功能富集分析及基因組百科全書（KEGG）信號轉導通路富集分析。選取 IGHG1、TRFE、SERPINA1蛋白質利用western blot對蛋白質進行驗證。
　　結果：膽固醇

3、結石和膽色素結石中均出現(xiàn)了特異性蛋白質，由質譜鑒定結果為轉鐵蛋白前體蛋白（TRFE）、白蛋白（ALB）、抗胰蛋白酶1（SERPINA1）、免疫球蛋白γ-1（IGHG1）、α血紅蛋白（HBA1）、β血紅蛋白（HBB），膽色素結石中不存在IGHG1。KEGG分析結果表明SERPINA1參與補體和凝血級聯(lián)反應，它不僅是一種代謝酶類抑制劑，同時其還參與先天免疫的調控。IGHG1、TRFE、SERPINA1蛋白質在膽囊結石中的表達量增高。