胚胎植入前遺傳學診斷的基礎(chǔ)及臨床應用研究——河南省首例PGD妊娠成功.pdf

1、植入前遺傳學診斷(preimplantationgeneticdiagnosis，PGD)是在胚胎著床之前即對其遺傳物質(zhì)進行分析，診斷胚胎是否有某些遺傳物質(zhì)異常，確定該胚胎是否適合移植的診斷方法。因此防止遺傳病的發(fā)生，并避免選擇性流產(chǎn)和多次流產(chǎn)可能造成身心的傷害以及倫理道德觀念的沖突。目前已用于基因或染色體異常高風險夫婦的遺傳學篩查。 PGD基本過程包括控制性超排卵，獲得卵母細胞，常規(guī)IVF／ICSI受精，體外培養(yǎng)至6-10細胞

2、期，活檢胚胎取1．2個卵裂球或者胚胎發(fā)育到囊胚期取部分細胞，根據(jù)指征選擇PCR或FISH方法進行相應的檢測，再將2-3個經(jīng)分析正常的胚胎移植入子宮。廣義講，PGD還包括受精前配子的檢測，如X、Y精子的分離，極體的基因或染色體檢測。 PGD技術(shù)的難度限制了其廣泛的應用。其難點主要表現(xiàn)在以下三方面。1卵裂球活檢；2單個卵裂球的固定；3單細胞分析技術(shù)：目前在PGD中常用的技術(shù)有單細胞聚合酶鏈式反應(polymerasechainrea

3、ction，PCR)和熒光原位雜交(nuorescenceinsimhybridization，F(xiàn)ISH)兩種基本方法。單細胞PCR存在三個特異的缺點：PCR擴增效率、污染及等位基因脫扣(Alleledrop-out，ADO)，而FISH不僅可以進行胚胎植入前性別診斷，更在研究胚胎嵌合現(xiàn)象、染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常方面具有PCR所沒有的優(yōu)勢。因此FISH是PGD中一種重要檢測方法。 目前關(guān)于單個卵裂球固定共有4種不同的固定方法：KC

4、l法；Tween．20／HCl法；甲醇／冰醋酸法；Tween-20／HCl+甲醇／冰醋酸法。另外，PGD中關(guān)于FISH方法探針和固定的卵裂球細胞核的變性方法有兩種：分開變性法和共變性法。四種固定方法和兩種變性方法在各個生殖中心分別有使用，但其系統(tǒng)比較國內(nèi)外尚未見報道。 本研究分為兩部分。第一部分比較常用的四種單個卵裂球的固定方法和兩種探針變性方法，旨在找到合適卵裂球固定方法及適合的FISH方法，并探討該方法進行PGD的可行性。第

5、二部分胚胎植入前遺傳學診斷的臨床應用。材料和方法 結(jié)論: 1、激光透明帶打孔方法輔助下采用吸拉法進行胚胎活檢是可行、有效的。 2、對不同的卵裂球固定方法進行比較，Tween-20／HCl+甲醇／冰醋酸法有較高的固定率和出信號率而均明顯優(yōu)于其它3種傳統(tǒng)單細胞固定方法。 3、比較了分開變性和共變性雜交方法的出信號率，其差異無顯著性。建立了適合本中心的熒光原位雜交方法并且成功的應用于臨床PGD。 4、對