杜氏肌營養(yǎng)不良植入前遺傳學(xué)診斷體系的建立與臨床前研究.pdf

1、植入前遺傳學(xué)診斷(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是輔助生殖技術(shù)與遺傳學(xué)診斷技術(shù)相結(jié)合而成的一種孕前診斷技術(shù)，它是在胚胎著床前對其遺傳物質(zhì)進行分析，做出相應(yīng)的遺傳學(xué)診斷，僅將無遺傳缺陷的胚胎植入子宮。PGD技術(shù)不僅可防止遺傳病的發(fā)生，而且避免了選擇性流產(chǎn)、引產(chǎn)給婦女帶來的身心壓力，是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的重大進展。杜氏肌營養(yǎng)不良(Ducherme muscular dystrophy,DMD)是神經(jīng)肌肉系

2、統(tǒng)中最常見的X一連鎖隱性遺傳病，發(fā)病率、死亡率高且尚無有效治療方法，目前主要通過產(chǎn)前診斷防止DMD患兒的出生。對DMD進行PGD不僅可以防止DMD患兒的出生，而且能夠避免反復(fù)流產(chǎn)、引產(chǎn)對孕婦造成的身心傷害，達到提高生活質(zhì)量、減輕家庭和社會負擔(dān)的目的，是一種比產(chǎn)前診斷更為積極的孕前診斷措施。但可用于PGD分析的材料非常有限，通常只有1-2個細胞，所以建立可行的單細胞基因檢測技術(shù)是開展DMD植入前遺傳學(xué)診斷的先決條件。 本研究旨在通

3、過建立單細胞三重PCR技術(shù)檢測DMD基因部分外顯子和性別鑒定位點 Amelogenin基因，探討該技術(shù)用于在缺失型杜氏肌營養(yǎng)不良家系中對攜帶者進行植入前遺傳學(xué)診斷的可行性。通過顯微操作獲得正常人及缺失型DMD患者單個淋巴細胞及無。DMD陽性家族史夫妻行IVF-ET／ICSI后廢棄的單個卵裂球細胞，對以上單細胞行外顯子8／外顯子47／Amelo三重PCR，檢測DMD基因兩個外顯子和性別鑒定位點Amelogenin基因。結(jié)果顯示在淋巴細胞擴

4、增中正常人擴增陽性率為95.3％(61／64)，假陽性率2.8％(1／36)；8號外顯子缺失型患者擴增陽性率為95.8％(46／48)，假陽性率3.3％(1／30)；47號外顯子缺失型患者擴增陽性率為95.8％(46／48)，假陽性率O(0／30)。單卵裂球細胞擴增陽性率82.5％(33／40)，假陽性率O(0／10)。證明本研究所建立的單細胞三重PCR技術(shù)具有較高擴增陽性率和特異性，有望在缺失型DMD家系中開展PGD的臨床應(yīng)用。并為其