大鼠原代腎小管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定及IL-18對HK-2分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響.pdf

1、　　目的：建立較理想的大鼠腎小管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)、傳代及鑒定方法；檢測培養(yǎng)的大鼠原代腎小管上皮細(xì)胞(RTECs)是否表達(dá)IL-18Rα和IL-18RβmRNA；檢測RTECs在IL-18刺激下分泌細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)纖維連接蛋白(FN)、Ⅰ型膠原的量，為揭示腎間質(zhì)纖維化機(jī)制提供新的途徑。 方法：采用腎小管節(jié)段貼塊法及0.2﹪胰蛋白酶消化20min兩種方法進(jìn)行原代培養(yǎng)，以0.25﹪胰蛋白酶(A組)、0.125﹪胰蛋白酶-0.02﹪

2、EDTA(B組)消化傳代，利用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定細(xì)胞類型。用RT-PCR檢測RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表達(dá)。用分別含0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL和100ng/mL濃度的IL-18培養(yǎng)液于24孔板中體外培養(yǎng)細(xì)胞株HK-2，24h、48h和72h分別收集一次每一濃度上清夜6孔，利用ELISA法分別檢測上清夜中FN、Ⅰ型膠原的含量。 結(jié)論：腎小管節(jié)段貼塊、0.125﹪胰蛋白酶-0.02