草酸鈣對體外培養(yǎng)犬腎小管上皮細胞的作用.pdf

1、尿石癥是犬貓常見的泌尿道疾病。近20年來，犬草酸鈣尿結石的發(fā)病率已超過了磷酸銨鎂結石成為最常見的犬尿結石病類型。其成因多樣，與飲食和品種均有關系。隨著對人類草酸鈣尿結石的研究不斷深入，研究人員在草酸鈣尿結石成因的研究方面出現(xiàn)了大量理論和實踐成果。本論文根據(jù)已被廣泛認同的草酸鈣結石形成理論：結石形成需要經(jīng)過礦物成核、生長、聚集、礦物與腎小管上皮細胞的粘附四個過程，設計了本實驗，以探討犬草酸鈣尿結石形成過程中草酸鈣對犬腎小管上皮細胞的作用。

2、
　　本研究通過體外傳代培養(yǎng)犬腎小管上皮細胞（MDCK細胞），在細胞培養(yǎng)液中加入終濃度分別為300μg/mL、600μg/mL、900μg/mL的草酸鈣，各自培養(yǎng)1h、2h、6h、12h、24h、48h，用顯微鏡觀察各作用時間下細胞在培養(yǎng)皿里的貼壁情況、細胞形態(tài)學變化和草酸鈣結晶在細胞內(nèi)外的粘附和聚集情況；然后將各時間段各濃度相應細胞樣本收集起來進行超聲破碎，通過CCK-8法測定細胞活性；用試劑盒測定MDCK細胞內(nèi)蛋白含量、過氧化

3、氫含量、丙二醛含量、乳酸脫氫酶含量、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活力和超氧化物歧化酶活力，測定細胞氧化損傷和抗氧化情況。將所得結果整理對比分析，探討草酸鈣刺激 MDCK細胞后，細胞活力的變化、草酸鈣結晶粘附和聚集情況以及細胞氧化損傷/抗氧化能力三者之間的關系。
　　實驗結果顯示，同一濃度作用下，MDCK細胞活力和細胞SOD活性都隨草酸鈣作用時間延長而下降，而細胞受氧化損傷程度隨實驗延長而加深，草酸鈣結晶在細胞內(nèi)外粘附和聚集增多；在同一作用時間

4、下，草酸鈣濃度越高，MDCK細胞活力和細胞SOD活性越低，細胞受氧化損傷及草酸鈣的粘附和聚集越嚴重。
　　由此得到結論：草酸鈣對犬腎小管上皮細胞具有細胞毒性，其中包括草酸鈣能引起細胞產(chǎn)生有害氧自由基而發(fā)生氧化損傷。此過程中，草酸鈣結晶開始粘附和聚集，而且隨著細胞損傷加劇和細胞碎片增多，結晶粘附和聚集更快更多。因此，草酸鈣在犬尿液中濃度越高，含草酸鈣尿液在腎臟中時間越長，越容易導致犬腎臟出現(xiàn)損傷并加劇草酸鈣結晶粘附，促進犬草酸鈣結石