氟對大鼠腎小管上皮細(xì)胞的毒性作用及硒干預(yù)機制的研究.pdf

1、目的：
　　本課題主要以大鼠腎小管上皮細(xì)胞為研究對象，采用單氟、單硒及硒氟聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞，旨在探討硒對氟誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞的拮抗作用和相關(guān)機制的研究。
　　方法：
　　腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)不同濃度氟、硒和硒氟聯(lián)合染毒培養(yǎng)48和72 h后，運用MTT法檢測細(xì)胞增殖情況；觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化運用HE染色法；采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的變化；運用試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中氧化應(yīng)激酶的活性；Real-Time PCR檢

2、測凋亡相關(guān)因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2 mRNA表達水平；Western-blot免疫印跡檢測Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　1．染氟48、72和96 h時，染氟組5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L均對細(xì)胞增殖呈抑制作用。低濃度染硒組能夠促進細(xì)胞增殖，高濃度染硒組能夠抑制細(xì)胞的增殖。與等劑量染氟組相比，硒干預(yù)

3、組細(xì)胞增殖顯著加快。
　　2．顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，對照組細(xì)胞生長正常，形態(tài)自然，細(xì)胞排列緊密；染氟組細(xì)胞體積增大，細(xì)胞間隙變寬，連接不緊密，出現(xiàn)多核現(xiàn)象，異常細(xì)胞數(shù)量增多；染硒組細(xì)胞形態(tài)與對照組大致相近；與等劑量染氟組相比，硒干預(yù)組細(xì)胞形態(tài)趨于正常。
　　3．細(xì)胞培養(yǎng)液中氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，隨染氟濃度的升高，細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX的活性逐漸降低；NO和MDA含量逐漸增多。染硒組差異不

4、明顯。與等劑量染氟組比，硒干預(yù)組中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX活性均升高；NO和MDA含量均降低。
　　4．細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位變化，隨染氟濃度的升高，凋亡率升高，線粒體膜電位降低；染硒組細(xì)胞凋亡率和線粒體膜電位無明顯變化；與等劑量染氟組相比，硒干預(yù)組細(xì)胞凋亡率顯著降低，線粒體膜電位顯著升高。
　　5．凋亡相關(guān)因子mRNA表達情況，隨染氟濃度的升高，除Bcl-2 mRNA表達水平降低外，其他凋亡因子Caspas

5、e-3、Caspase-9和Bax mRNA表達水平顯著升高。與等劑量染氟組相比，硒干預(yù)組Bcl-2 mRNA表達水平升高，而Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA表達水平都顯著降低。
　　6．凋亡相關(guān)因子蛋白表達測定結(jié)果，與對照組比較，隨染氟濃度的升高，Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表達上調(diào)，而Bcl-2蛋白表達下調(diào)。染硒組無統(tǒng)計學(xué)意義。與等劑量染氟組相比，硒

6、干預(yù)組Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表達下調(diào)，而Bcl-2蛋白表達上調(diào)。而各組中pro-Caspase-3和pro-Caspase-9蛋白表達沒有明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1．硒對氟誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡有拮抗作用。
　　2．硒可以通過調(diào)節(jié)抗氧化酶活性，提高機體抗氧化能力，加快自由基的清除，使細(xì)胞免受氧化損傷。
　　3．硒可以通過調(diào)節(jié)凋亡因子Caspas