人結(jié)腸癌細(xì)胞中雌激素受體β與mTORC1和mTORC2通路的關(guān)系研究.pdf

1、背景與目的：
　　雌激素受體（ER）β對人結(jié)腸癌的防護(hù)起主導(dǎo)作用。它能抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖和移植瘤的生長，但具體作用機(jī)制不明。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一種絲/蘇氨酸激酶，由兩種功能復(fù)合物組成，mTORC1（對雷帕霉素敏感）和mTORC2（對雷帕霉素不敏感），調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和代謝。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，ERβ對mTOR有負(fù)向調(diào)節(jié)作用。本研究旨在進(jìn)一步探討ERβ與mTORC1和mTORC2信號通路的關(guān)系。
　　

2、方法：
　　以人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116（p53野生型,雷帕霉素敏感細(xì)胞）和SW480（p53突變型，雷帕霉素耐藥細(xì)胞）為研究對象。在ERβ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后，通過熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的自噬現(xiàn)象；采用 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖的變化；蛋白印跡法檢測LC3-II蛋白、mTOR、Rictor、Akt、AMPK和p70S6K蛋白以及相應(yīng)磷酸化蛋白的表達(dá)變化；實(shí)時定量PCR法檢測DRAM1、Sestrin1和Sestrin2的mRNA表達(dá)變化。觀

3、察SW480細(xì)胞轉(zhuǎn)染ER?質(zhì)粒后，聯(lián)用ER激動劑Biochanin A與否對磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　與在HCT116細(xì)胞中的效應(yīng)相似，ERβ在SW480細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)后，不需ER激動劑也能明顯下調(diào)p-mTOR的表達(dá)。ER?過表達(dá)能抑制人結(jié)腸癌 HCT116和 SW480細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其發(fā)生自噬。LC3-II和p-AMPK蛋白在HCT116細(xì)胞中分別上調(diào)了2.81倍和1.80倍（P<0.

4、05）；在 SW480細(xì)胞中分別上調(diào)了1.70倍和2.48倍（P<0.05）。p-mTOR、p-p70S6K、Rictor和p-Akt蛋白的抑制率在HCT116細(xì)胞分別下降29.52％、34.54%、33.93%和46.68%，在SW480細(xì)胞分別下降37.89%、41.86%、52.13%和27.31%。除了Sestrin1 mRNA在SW480細(xì)胞中的表達(dá)無明顯變化外，DRAM1和Sestrin2 mRNA的表達(dá)量在兩種細(xì)胞中都有顯