腎安提取液阻緩腎纖維化的作用機理研究.pdf

1、生化學、腎臟病理組織學及3T3成纖維細胞學四個方面對腎安提取液進行研究,旨在探討腎安提取液阻緩腎纖維化的作用及其機理.藥學研究為腎安提取液初步建立工藝及質(zhì)量標準.以黃芪甲苷、淫羊藿苷、大黃蒽醌作為質(zhì)控指標,黃芪采用8倍量水、提取2次、每次1小時的工藝條件,中空纖維過濾提取黃芪甲苷和黃芪多糖,得每10克復方生藥含黃芪甲苷不低于2.5mg.淫羊藿、大黃合并采用10倍量70％乙醇,提取2次,每次1小時的工藝條件,得每10克復方生藥含淫羊藿苷不

2、低于1.8mg,1,8-二羥基蒽醌不低于2.8mg.血液生化學的研究,采用腎大部切除法制作慢性腎衰竭(CRF)大鼠模型,隨機分為七組,正常組、假手術組、模型組、腎安2g/kg組、腎安4g/kg組、腎安8g/kg組及陽性藥物尿毒清3.6g/kg對照組,給藥療程2個月.以大鼠體重增長率、存活率、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血清白蛋白(ALB)、血清總蛋白(TP)、血紅蛋白(Hb)、紅細胞計數(shù)(RBC)、血鈣(Ca)、血磷(P)、血

3、清超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)為觀察指標.結果表明,腎安提取液各劑量組給藥1個月后與模型組相比,CRF大鼠體重、血清ALB、Hb、RBC較模型組增加(P<0.05,P<0.01),隨著給藥時間延長,2個月的作用更加明顯(P<0.05,P<0.01);在提高Hb、RBC方面,腎安中、高劑量組優(yōu)于尿毒清組(P<0.05),并呈良好量效關系(r=1,r=0.969);給藥后1個月,腎安提取液三個劑量組血清SOD較模型組明顯增高(

4、P<0.05,P<0.01),NO含量較模型組明顯降低(P<0.05,P<0.01);給藥后2個月,腎安提取液中、高劑量組血鈣含量較模型組明顯升高(P<0.05),磷含量明顯降低(P<0.05,P<0.01);腎安提取液三個劑量組均能明顯降低CRF大鼠BUN和Scr(P<0.05,P<0.01),呈良好量效關系(r=0.999,);在降低BUN方面,腎安中劑量組明顯優(yōu)于尿毒清組(P<0.05).提示腎安提取液通過改善CRF大鼠營養(yǎng)狀況及

5、蛋白質(zhì)代謝、糾正低鈣、高磷、減輕NO損傷、增加氧自由基清除,從而延緩腎臟功能,提高CRF大鼠存活率(與模型組相比P<0.05).病理組織學研究,采用殘余腎(RK)模型;組織取材于血液生化學研究部分;分組方法相同;采用腎組織病理半定量積分、Ⅳ型膠原(CoⅣ)半定量積分、增殖細胞核抗原(PCNA)陽性細胞計數(shù)、腎小球細胞總數(shù)為觀察指標.結果表明,腎安提取液各劑量組CoⅣ積分較模型組明顯降低(P<0.05,P<0.01),其中,腎安高劑量組C

6、oⅣ積分較尿毒清組有顯著差異(P<0.05);腎安各劑量組腎小球內(nèi)細胞總數(shù)與PCNA陽性細胞數(shù)均較模型組顯著降低(P<0.05,P<0.01);在降低腎小球細胞總數(shù)上,腎安高劑量組明顯優(yōu)于尿毒清組(P<0.05).各劑量組腎臟病理半定量積分明顯低于模型組(P<0.05,P<0.01),其中,腎安高劑量組明顯優(yōu)于尿毒清組(P<0.01).提示腎安提取液通過抑制RK大鼠腎臟PCNA陽性細胞及總的腎小球細胞的增殖,減少細胞外基質(zhì)(ECM)沉積

7、,從而減輕殘余腎組織病理損傷.細胞學研究,采用3T3細胞系作為成纖維細胞模型.研究表明,3T3細胞在受到堿性成纖維細胞因子(bFGF)刺激后,表現(xiàn)出旺盛的增殖和生長狀態(tài),說明這種細胞不僅是多種炎性介質(zhì)的靶細胞,同時也是重要的免疫效應細胞.腎安提取液對3T3細胞的半數(shù)細胞毒濃度(TC<,50>)為5.98mg/ml,最大無毒濃度(TCo)小于3.1mg/ml,對細胞的抑制作用呈顯著的劑量依賴關系;48小時中、高劑量組、72小時低、中、高劑