慢性移植腎腎病移植腎纖維化機制的研究.pdf

1、臨床背景在過去的二十年里，尸體及親屬供腎移植腎的1年存活率已經(jīng)普遍超過80％及90％，這些成就歸功于我們對移植免疫學(xué)理解的加深和良好的組織配型、器官保存及普樂可復(fù)、環(huán)孢霉素等更強、更具選擇性的免疫抑制劑的應(yīng)用。雖然普樂可復(fù)和環(huán)孢霉素的應(yīng)用減少了急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率及嚴(yán)重程度，然而在過去的十年里的應(yīng)用證明它們對于治療移植腎慢性功能衰竭并沒有多大效果，而且移植腎的半數(shù)存活率也沒有明顯提高。近50％的移植腎在移植后十年左右即出現(xiàn)移植腎功能衰竭

2、而要重新進(jìn)行血透或接受再移植。引起遠(yuǎn)期移植腎功能衰竭的最常見原因是慢性移植腎腎病，它所引起的移植腎功能衰竭的例數(shù)占腎移植1年后因為各種原因發(fā)生移植腎功能衰竭總例數(shù)的50-80％。而慢性移植腎腎病最主要的特征就是移植腎的纖維化，所以研究慢性移植腎腎病移植腎纖維化的機制已是當(dāng)前刻不容緩的課題。 目的研究慢性移植腎腎病(CAN)移植腎組織病理學(xué)特點及血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型膠原(Col

3、lagenⅣ)在慢性移植腎病移植腎纖維化中的作用及其三個因子之間的相互間關(guān)系，分析慢性移植腎腎病移植腎纖維化的機制，為臨床治療慢性移植腎腎病提供方向及相應(yīng)理論依據(jù)。 方法收集19例經(jīng)病理明確為診斷慢性移植腎腎病并行移植腎切除的移植腎標(biāo)本?；颊邽樾型N異體腎移植術(shù)后1～11年移植腎失功者，平均移植腎存活時間為4.4年，其中男性9例，女性10例，年齡20～55歲。11例采用以CsA為基礎(chǔ)的免疫抑制治療方案，8例采用FK506治療。以

4、10例正常腎組織作為對照組，其中6例為外傷后行腎切除者，4例為腎癌根治術(shù)癌旁5cm以外正常組織石蠟標(biāo)本，年齡24～45歲。29例標(biāo)本均制成蠟塊，同時進(jìn)行HE染色、PASM染色和Masson染色。同時對移植腎組織標(biāo)本按照Banff97病理診斷分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理診斷及分級，病理診斷分級標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級輕度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變，Ⅱ級中度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變，Ⅲ級重度間質(zhì)纖維化和腎小管

5、萎縮、消失伴或不伴有慢性排斥反應(yīng)的特異改變。接著，所有標(biāo)本均用免疫組織化學(xué)SABC法檢測AT1R、TGF-β1及CollagenⅣ的表達(dá)，圖像分析方法采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報告分析系統(tǒng)，通過光學(xué)顯微鏡放大200倍攝取并分析圖像。每例隨機取腎小球數(shù)10個，腎小管隨機視野取10個，每例腎小管總數(shù)大于60個。對所選視野中的陽性信號進(jìn)行圖像分析，用半定量法估計各因子表達(dá)情況：在免疫組化標(biāo)本中，計算每個腎小球陽性著色的面積及

6、整個腎小球面積，以兩者的比值表示每種成分在腎小球中的含量，計算每例切片上所有腎小球各比值的均值，以此值代表此例患者某種成分在腎小球中的相對含量。同樣，計算每個視野中腎小管和腎間質(zhì)陽性著色面積和視野總面積比值，取其均值代表此例患者某種成分在腎小管和間質(zhì)的相對含量。統(tǒng)計學(xué)處理方法采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，AT1R、TGF-β1或Ⅳ型膠原在CAN組與正常腎組織中表達(dá)的比較采用Mann-WhitneyTest，各CAN病理分級間

7、比較采用NemenyiTest，AT1R、TGF-β1與Ⅳ型膠原三者間兩兩關(guān)系采用Spearman法，取雙側(cè)，P＜0.05為統(tǒng)計學(xué)差異有顯著性。 結(jié)果慢性移植腎腎病移植腎病理組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為腎小球不同程度萎縮、纖維化、玻璃樣變，間質(zhì)不同程度的纖維化和淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤，小動脈內(nèi)膜增厚、纖維化、玻璃樣變，部分管腔狹窄或閉塞，腎小管不同程度的萎縮，排列較紊亂，部分髓質(zhì)的集合管擴(kuò)張，可見較多的蛋白管型等。同時AT1R、TGF-β

8、1和Ⅳ型膠原SABC法染色表明，正常腎組織中AT1R在血管平滑肌細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞有弱陽性表達(dá)；TGF-β1著色主要位于腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞漿，多呈弱陽性表達(dá)；Ⅳ型膠原主要分布在腎小球、腎小管基底膜及包曼氏囊壁和系膜區(qū)，腎間質(zhì)中少量散在分布，腎小管上皮細(xì)胞中未見表達(dá)。而慢性移植腎腎病移植腎組織中AT1R在腎小球、腎小管上皮細(xì)胞胞膜、血管平滑肌細(xì)胞、血管周圍及腎間質(zhì)，表達(dá)較正常腎組織明顯增加；Ⅳ型膠原除在腎小球、腎小管基底膜及包曼氏囊壁和

9、系膜區(qū)的表達(dá)較正常腎組織有不同程度增加外，在腎間質(zhì)中分布亦增加十分明顯，腎小管上皮細(xì)胞中則無表達(dá)；TGF-β1則在腎小管上皮細(xì)胞胞漿和胞膜多呈強陽性表達(dá)，部分腎小球包曼氏囊壁亦有表達(dá)。統(tǒng)計學(xué)分析資料后表明AT1R、TGF-β1和Ⅳ型膠原在CAN組腎小球及腎小管、間質(zhì)的表達(dá)比正常腎組織明顯增多，兩者間差異均有顯著性(p值均＜0.01)，且AT1R、TGF-β1和Ⅳ型膠原的表達(dá)隨CAN病理分級的加重而增加的趨勢；AT1R和TGF-β1兩者分

10、別在CAN腎小球及腎小管間質(zhì)中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.843，p＜0.01及r=0.836，p＜0.01)。TGF-β1和Ⅳ型膠原兩者分別在CAN腎小球及腎小管間質(zhì)中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.943，P＜0.01及r=0.910，P＜0.01)。 結(jié)論慢性移植腎腎病移植腎病理組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為腎小球硬化、腎小管萎縮、間質(zhì)纖維化、血管內(nèi)膜增生和單核細(xì)胞浸潤，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積聚是腎纖維化的主要病理基礎(chǔ)。ECM的主要成分是膠原纖

11、維(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原)、非膠原性糖蛋白(層黏連蛋白、纖維連接蛋白等)、彈性蛋白、蛋白多糖和氨基聚糖。在腎臟組織中，Ⅳ型膠原是主要的膠原成分，本實驗表明CAN中Ⅳ型膠原表達(dá)有隨CAN病理分級增加而增多的趨勢，Ⅳ型膠原的表達(dá)程度反映了移植腎纖維化的程度，證實Ⅳ型膠原的沉積是移植腎纖維進(jìn)程中的一個重要因素，提示應(yīng)用抑制Ⅳ型膠原的產(chǎn)生或促使其降解的藥物可能起到延緩其纖維化進(jìn)程的作用。而TGF-β是一種很強的纖維發(fā)生細(xì)胞因子，它與一些慢性腎臟及其

12、它臟器疾病的纖維化密切相關(guān)。本研究表明TGF-β1在CAN的移植腎組織中呈高表達(dá)，并隨CAN病理分級的增加有增多的趨勢，同時它和Ⅳ型膠原的表達(dá)呈正相關(guān)，提示TGF-β1可能通過調(diào)控移植腎組織中Ⅳ型膠原等成分的變化引起移植腎的纖維化，說明TGF-β1在CAN纖維化進(jìn)程中的重要的意義。同時本研究表明CAN移植腎組織AT1R呈高表達(dá)，且隨CAN病理分級加重有增加的趨勢，同時AT1R的表達(dá)與TGF-β1的表達(dá)呈正相關(guān)。這說明移植腎組織中AT1R

13、異常過度增加，在與ATⅡ結(jié)合后，引起TGF-β1表達(dá)增加，最后導(dǎo)致移植腎纖維化，在CAN的移植腎纖維化進(jìn)程中起著重要的作用。洛沙坦(1osartan，LOS)是一種AT1R的拮抗劑，CampistolJM[13]和el-AgroudyAE[14]等用洛沙坦治療CAN的患者，除產(chǎn)生顯著的降壓及減輕蛋白尿的作用，同時也發(fā)現(xiàn)其能顯著降低TGF-β血漿水平。同時這也從另一個方面說明ATⅡ與AT1受體結(jié)合會促進(jìn)了TGF-β的生成。但ACEⅠ類或A