外用中藥與組織工程技術(shù)相結(jié)合修復(fù)皮膚缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究目的:1.建立和完善皮膚細(xì)胞分離和純化技術(shù).2.將中西醫(yī)結(jié)合治療感染性開(kāi)放骨折的特色中藥應(yīng)用于組織工程皮膚的構(gòu)建;制備高效免疫活性的皮膚細(xì)胞誘導(dǎo)物,使自體皮膚細(xì)胞在體外大量擴(kuò)增;構(gòu)建載藥皮膚工程支架,通過(guò)體外觀察,為制備新型的具有良好組織相容性、生物安全性、抗感染性、便于使用和貯存的組織工程皮膚提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:1.取同窩兔4cm<'2>梭形全層皮膚,0.38％中性蛋白酶(Dispase Ⅱ)/0.053％胰蛋白酶(Trypsi

2、n)-0.04％EDTA二步分離法獲取單個(gè)表皮細(xì)胞(Keratinocyte,KC)、成纖維細(xì)胞(Fibroblast,FB);對(duì)分離培養(yǎng)KC進(jìn)行角蛋白19、β<,1>整合素免疫組化染色鑒定.2.提取制備生肌液;對(duì)組方及單味藥的離子濃度、有機(jī)物含量、微量元素含量進(jìn)行分析;將其作為種子細(xì)胞刺激因素,分別用體外培養(yǎng)的KC、FB用MTT方法進(jìn)行應(yīng)用濃度篩選.3.考察明膠-殼聚糖復(fù)合材料的體內(nèi)降解過(guò)程;構(gòu)建細(xì)胞-載體支架復(fù)合物;分別用半定量觀察

3、、MTT定量方法、組織學(xué)觀察、掃描電鏡觀察方法考察載體支架與細(xì)胞的生物相容性及載藥后對(duì)細(xì)胞增殖的影響.4.應(yīng)用所構(gòu)建的細(xì)胞-載藥支架復(fù)合物修復(fù)家兔皮膚缺損;進(jìn)行大體及組織學(xué)觀察,考察修復(fù)效果.結(jié)論:1.采用DispaseⅡ/Trypsin-EDTA二步法可獲得具有強(qiáng)大的潛在增殖能力、高純度的KC.2.生肌液不但是一種具有高效免疫活性的皮膚細(xì)胞誘導(dǎo)物,而且對(duì)細(xì)胞的增殖作用具有一定量效和時(shí)效關(guān)系,復(fù)方藥中各種組分相互協(xié)同、拮抗、調(diào)節(jié)而形成一

4、個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的促增殖環(huán)境.3.載有生肌液的明膠-殼聚糖基質(zhì)材料除具有一定三維結(jié)構(gòu),使細(xì)胞能夠在其表面和孔隙中生長(zhǎng),符合組織工程對(duì)于細(xì)胞支架材料的要求外,且有效促進(jìn)KC和FB的增殖功能并能夠有效抑制炎性反應(yīng).4.將處于增殖最旺盛時(shí)期的種子細(xì)胞與含有誘導(dǎo)作用的藥物-載體支架復(fù)合貼附于創(chuàng)面,使種子細(xì)胞在最適環(huán)境中增殖、分化,能夠在最短的時(shí)間內(nèi)有效擴(kuò)展皮膚缺損處的覆蓋面積,盡量縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間,新生的鱗狀上皮組織符合正常表皮的結(jié)構(gòu)特征,從而達(dá)到快