RASSF1A基因去甲基化對(duì)人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長抑制作用及其機(jī)理研究.pdf

1、[目的]
　　 RASSF1A基因是一種重要的腫瘤抑制基因，在人類許多實(shí)體腫瘤中，其啟動(dòng)子CpG島區(qū)域常常會(huì)發(fā)生高甲基化而導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄沉默。5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)能使因甲基化而失活的腫瘤抑制基因重新激活，進(jìn)而抑制腫瘤的生長。本實(shí)驗(yàn)通過觀察5-Aza-CdR對(duì)體外培養(yǎng)的人低分化鼻咽癌細(xì)胞(CNE-2Z)和體內(nèi)裸鼠移植瘤的生長抑制作用與影響，進(jìn)一步探索RASSF1A

2、基因是否在人低分化鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。同時(shí)，探討該藥物的抗腫瘤效應(yīng)，為臨床治療鼻咽癌提供新的作用靶點(diǎn)。
　　 [方法]
　　 1.利用MSP、RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)等方法檢測(cè)CNE-2Z細(xì)胞RASSF1A基因的甲基化水平及轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。
　　 2.建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，觀察5-Aza-CdR處理組和對(duì)照組裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移等情況。
　　 3.利用MSP、RT-PCR和免疫組

3、織化學(xué)等方法進(jìn)一步檢測(cè)裸鼠移植瘤組織內(nèi)RASSF1A基因的甲基化水平及轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況。
　　 [結(jié)果]
　　 1.體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：
　　 對(duì)照組CNE-2Z細(xì)胞內(nèi)RASSF1A基因啟動(dòng)子CpG島區(qū)域呈高甲基化，用5-Aza-CdR處理CNE-2Z細(xì)胞后RASSF1A基因的高甲基化水平降低，RASSF1A基因蛋白表達(dá)增加。
　　 2.裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)
　　 1)用藥組平均瘤重為1.237±0.809g

4、，比對(duì)照組平均瘤重2.512±1.566g明顯降低(P<0.05)。
　　 2)用藥組侵襲轉(zhuǎn)移率為15.00％；對(duì)照組侵襲轉(zhuǎn)移率為15.38％。兩組結(jié)果無明顯差別。
　　 3)對(duì)照組瘤組織的RASSF1A基因啟動(dòng)子CpG島區(qū)域均存在高甲基化，應(yīng)用5-Aza-CdR后，RASSF1A基因的高甲基化水平降低，RASSF1A基因蛋白表達(dá)水平增加。
　　 [結(jié)論]
　　 1.RASSF1A基因在體外CNE-2Z細(xì)