2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
　　評(píng)價(jià)肺炎嗜衣原體(Chlamydophila pneumoniae, Cpn)假定III型分泌系統(tǒng)(Type III secretion system, T3SS)效應(yīng)蛋白Cpn0423和Cpn0710的免疫活性;檢測(cè)其在Cpn感染的人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2)中的定位情況;觀察Cpn0423和Cpn0710蛋白的表達(dá)時(shí)相,為尋找新的Cpn和宿主細(xì)胞相互作用的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　提取重組

2、質(zhì)粒 pGEX6p-2/Cpn0423和pGEX6p-2/Cpn0710,并轉(zhuǎn)化至表達(dá)菌E.coli BL21中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白Cpn0423和Cpn0710,利用聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)和蛋白免疫印跡法(Western-Blot)分析和鑒定表達(dá)產(chǎn)物;采用GST純化樹脂純化重組蛋白,并濃縮純化蛋白,BCA法測(cè)定蛋白濃度;重組蛋白皮下注射免疫 BALB/c小鼠,制備 Cpn0423、Cpn0710多克隆抗體,EL

3、ISA法檢測(cè)免疫小鼠血清中多克隆抗體的效價(jià),分析重組蛋白的免疫原性;間接免疫熒光法(Indirect Immunofluorescence Assay, IFA)檢測(cè)Cpn0423和Cpn0710蛋白在Cpn感染Hep-2細(xì)胞72h后的定位情況。同時(shí)應(yīng)用IFA觀察Cpn0423和Cpn0710蛋白在Cpn感染細(xì)胞6h,12h,24h,36h,48h,72h,96h,120h后不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量的變化及Cpn包涵體形態(tài)學(xué)上的變化特征。

4、>　　結(jié)果:
　　Cpn0423和Cpn0710重組蛋白在E.coli BL21菌中獲得高效表達(dá),Mr分別約為41kDa和35kDa,對(duì)溫度、IPTG和時(shí)間等誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行系列的摸索優(yōu)化后,獲得可溶性表達(dá)蛋白;采用GST純化樹脂純化獲得純度在95％以上的重組蛋白;重組蛋白免疫BALB/c小鼠,間接ELISA檢測(cè)免疫血清特異性抗體,效價(jià)分別為1:16000和1:12000。 Cpn成功感染Hep-2細(xì)胞,應(yīng)用IFA檢測(cè)Cpn042

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