PTHrP和Ihh在豬脊柱側(cè)凸模型椎體軟骨終板中的表達(dá)及意義.pdf

1、特發(fā)性脊柱側(cè)凸（idiopathic scoliosis,IS）是臨床上比較常見(jiàn)的一種脊柱三維畸形，尤其好發(fā)于兒童及青少年人群，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病因尚未明確。軟骨內(nèi)成骨是軀干骨形成的主要方式，椎體上下端的軟骨終板在脊柱的縱向生長(zhǎng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其成骨的活性與側(cè)凸的發(fā)生存在密切關(guān)系，受一系列內(nèi)分泌激素及信號(hào)系統(tǒng)的精密調(diào)控。近年來(lái)研究者們已證實(shí)Sox9，F(xiàn)GF，TGF等細(xì)胞因子與特發(fā)性脊柱側(cè)凸形成的關(guān)系，但 Ihh-PTHrP信號(hào)系統(tǒng)對(duì)脊柱

2、側(cè)凸發(fā)生發(fā)展的影響卻鮮見(jiàn)報(bào)道。Ihh是印度豪豬蛋白的簡(jiǎn)稱，屬于 Hedgehog基因家族中的一種亞型，主要在前肥大和肥大軟骨期細(xì)胞上表達(dá),在軟骨內(nèi)成骨過(guò)程中起至關(guān)重要的作用；PTHrP基因定位于人第12條染色體，主要由關(guān)節(jié)處的軟內(nèi)細(xì)胞分泌，且作用于下層細(xì)胞，抑制肥大細(xì)胞凋亡和軟骨細(xì)胞的進(jìn)一步分化，是軟骨增殖、分化及生長(zhǎng)形成過(guò)程中的另一個(gè)重要因素。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)豬脊柱側(cè)彎模型凹凸側(cè)椎體軟骨終板中 Ihh、PTHrP表達(dá)水平的研究，推斷其兩側(cè)

3、軟骨內(nèi)化骨的差異，進(jìn)一步探索特發(fā)性脊柱側(cè)凸發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　目的:
　　通過(guò)免疫組化方法來(lái)對(duì) Ihh、PTHrP在豬側(cè)彎模型雙側(cè)椎體軟骨終板中的表達(dá)水平及部位進(jìn)行了解，證實(shí)Ihh與PTHrP在軟骨中表達(dá)的相關(guān)性，探討豬脊柱側(cè)凸模型形成的分子生物學(xué)機(jī)制，為更深入地研究人特發(fā)性脊柱側(cè)凸的病因?qū)W奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　取2月齡脊柱側(cè)彎幼豬2只，隨機(jī)編為1號(hào)、2號(hào)，自代償彎椎體凸側(cè)、中央及凹側(cè)分別取下軟

4、骨終板共計(jì)48份作為實(shí)驗(yàn)組，分為A（凸側(cè)）、B（中央）、C（凹側(cè)）3組，每組16份；另取2月齡正常幼豬2只，隨機(jī)編為3、4號(hào)，處死后自T10-L2椎體左右側(cè)分別取下軟骨終板共計(jì)32份作為空白對(duì)照組，分為D（左側(cè)）、E（右側(cè)）組，每組16份。通過(guò)免疫組化方法對(duì)5組軟骨終板的Ihh、PTHrP的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，觀察兩種因子在各組中的表達(dá)水平及部位，并檢測(cè)其在各樣本中的平均光密度值。
　　結(jié)果：
　　1、豬側(cè)彎模型各節(jié)段椎體終板HE

5、染色均存在類似長(zhǎng)骨的生長(zhǎng)板結(jié)構(gòu)，呈淡藍(lán)色，大致可分為儲(chǔ)備區(qū)、增生區(qū)、成熟區(qū)及鈣化區(qū)，實(shí)驗(yàn)組頂椎凹側(cè)生長(zhǎng)板較凸側(cè)稍薄，雙側(cè)細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞體積無(wú)明顯差異，空白對(duì)照組間雙側(cè)未見(jiàn)明顯差異；
　　2、Ihh主要表達(dá)于軟骨終板中的增殖軟骨細(xì)胞及肥大軟骨細(xì)胞胞漿中，PTHrP在軟骨終板中的儲(chǔ)備區(qū)、增殖區(qū)及成熟區(qū)軟骨細(xì)胞胞漿中均存在表達(dá)，但以增殖區(qū)及成熟區(qū)軟骨細(xì)胞中的表達(dá)為主；
　　3、Ihh在 A、B、C、D、E五組的表達(dá)量分別為0.350

6、4±0.0233，0.2473±0.0286，0.1126±0.0306，0.2189±0.0366，0.2365±0.0226，PTHrP在A、B、C、D、E五組的表達(dá)量分別為0.4306±0.0154，0.2376±0.0248，0.1473±0.0229，0.2471±0.0218，0.2685±0.0456；A組與B、C、D、E組比較，p值均<0.01，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；C組與A、B、D、E組進(jìn)行比較，p值均<0.01，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、差異；B、D、E組進(jìn)行比較，p值均>0.01，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　　4、對(duì) Ihh、PTHrP的表達(dá)進(jìn)行簡(jiǎn)單相關(guān)分析，r值=0.585，p值<0.01，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，存在正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　1、軟骨終板的成骨活性在實(shí)驗(yàn)組中凸側(cè)明顯高于凹側(cè)，而在空白對(duì)照組雙側(cè)則無(wú)明顯差異；
　　2、Ihh、PTHrP在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)為A（凸側(cè)）>B（中央）>C（凹側(cè)），這種差異性表達(dá)可能與豬脊柱側(cè)凸模型的形成密切相關(guān)；<