CD4+Nrp1+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腎臟缺血預(yù)適應(yīng)中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:缺血再灌注損傷是急性腎損傷重要的病因之一。研究證實(shí),T細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在IRI的發(fā)生過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)一種現(xiàn)象:腎臟在遭受一次短暫的缺血后,會(huì)對(duì)后續(xù)發(fā)生的缺血損傷有一定的耐受性,稱之為缺血預(yù)適應(yīng),其發(fā)生機(jī)制目前尚不明確。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞參與了一系列腎臟病的發(fā)生。因此,在本課題中,我們將研究CD4+Nrp1+T細(xì)胞在缺血預(yù)適應(yīng)中的作用及其機(jī)制。
　　方法:C57BL/6小鼠雙側(cè)腎蒂鉗夾25min后開(kāi)放血流,建

2、立缺血預(yù)適應(yīng)模型(IP)。7天后再次鉗夾雙側(cè)腎蒂35min,開(kāi)放血流。檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)腎臟病理及血清肌酐水平的變化。分離IP后7天小鼠的淋巴細(xì)胞,流式分選CD4+T和CD8+T細(xì)胞,并以假手術(shù)組CD4+T和CD8+T細(xì)胞為對(duì)照,過(guò)繼輸注給另一正常C57小鼠,之后接受35min腎蒂鉗夾術(shù)后開(kāi)放血流,觀察腎功能及腎臟病理變化。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)IP后不同時(shí)間點(diǎn)腎臟、脾臟和外周血中CD4+Nrp1+T細(xì)胞的比例,并檢測(cè)其表達(dá)Foxp3的比例。分選

3、IP小鼠CD4+Nrp1+T細(xì)胞,體外構(gòu)建淋巴細(xì)胞增殖系統(tǒng),觀察對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響。采用CD25單抗清除Treg,觀察Treg細(xì)胞比例、腎臟病理及腎功能的變化。
　　結(jié)果:第一次的25min缺血,對(duì)第二次的35min缺血腎臟有明顯的保護(hù)作用,表現(xiàn)在腎臟病理?yè)p害減輕,肌酐較對(duì)照組低。IP小鼠CD4+T細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移腎臟保護(hù)作用給一只正常的C57,使其抵抗35minIRI損傷,而CD8+T細(xì)胞不能轉(zhuǎn)移腎臟保護(hù)作用。IP小鼠腎臟、脾臟及

4、外周血中CD4+Nrp1+T細(xì)胞較對(duì)照組明顯上升。CD4+Nrp1+T細(xì)胞中Foxp3+T細(xì)胞所占比例均>95％。分選CD4+Nrp1+T細(xì)胞可在體外抑制淋巴細(xì)胞增殖。腹腔注射CD25單抗(PC61),可清除小鼠體內(nèi)70%以上的CD4+Nrp1+T細(xì)胞,同時(shí),應(yīng)用此抗體后IP的腎臟保護(hù)作用消失。
　　結(jié)論:腎臟短暫的缺血會(huì)導(dǎo)致腎臟內(nèi)CD4+Nrp1+T細(xì)胞比例增加,此類(lèi)細(xì)胞在體內(nèi)及體外均能發(fā)揮免疫抑制功能,使腎臟對(duì)后續(xù)發(fā)生的IRI