抗氧化劑對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺高遷移率蛋白-1表達的影響及意義.pdf

1、目的： 研究重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)大鼠胰腺組織高遷移率蛋白-1(high mobility group box protein-1，HMGB1)表達的變化規(guī)律，以及抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(Pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)對重癥急性胰腺炎大鼠胰腺高遷移率蛋白-1表達的影響及意義。 方法： Sprague-Dawley(

2、SD)大鼠144只按完全隨機設(shè)計分為3組：A組(48只)，為對照組：B組(48只)，為重癥急性胰腺炎組；C組(48只)，為重癥急性胰腺炎加吡咯烷二硫代氨基甲酸酯干預(yù)組。按術(shù)后1h、3h、6h、12h、24h、48h六個時間點，三組大鼠每時間點取8只。模型采用十二指腸壁穿刺經(jīng)乳頭逆行胰膽管注射5％牛磺膽酸鈉1ml/kg建立。A組開腹后，只行經(jīng)乳頭膽胰管穿刺未向膽胰管內(nèi)注入任何液體，其余操作同B組。C組在造模前1h給予腹腔注射PDTC30m

3、g/kg(PDTC粉末用生理鹽水溶解制成1.5％的PDTC溶液)，余兩組注入等量生理鹽水。模型建立后，按上述時間點將生存動物麻醉后下腔靜脈取血處死，留取腹水和血清，并取一部分胰腺組織置液氮過夜后，-70℃冰箱保存，另一部分經(jīng)10％福爾馬林固定，以制作石蠟切片。應(yīng)用免疫熒光觀察胰腺組織核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)的活化，免疫組化觀察胰腺高遷移率蛋白-1(HMGB1)的表達。蛋白免疫印跡法(western

4、blot)檢測胰腺NF-κB的活性及HMGB1表達水平。組織勻漿酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測胰腺腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)水平。石蠟切片HE染色觀察胰腺組織病理變化，并做病理評分，同時檢測腹水量及血清淀粉酶(Amylase，AMY)水平。 結(jié)果： 1.免疫熒光顯示，SAP時胰腺組織NF-

5、κB顯著活化，活化的NF-κB從胰腺腺泡細胞胞漿轉(zhuǎn)移到細胞核內(nèi)。western blot結(jié)果顯示，B組胰腺組織NF-κB活性在術(shù)后1h即開始升高，3h達高峰，6～12h逐漸下降，但各時點與A組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 2.組織勻漿ELISA法檢測結(jié)果表明，B組胰腺 TNF-α于術(shù)后1h開始明顯升高，6h達到高峰，12h即大幅下降，此后一直以較低水平維持至48h，但1～48h各時點均顯著高于A組(P<0.05)。

6、免疫組化顯示：SAP時胰腺腺泡細胞及炎癥細胞胞核、胞漿均含有棕黃色HMGB1，胰腺組織間質(zhì)內(nèi)亦可見棕黃色HMGB1。western blot顯示：與A組相比，B組胰腺HMGB1水平于術(shù)后12h開始顯著升高，24h達峰值，48h仍維持在較高水平(P<0.05)。 3.與B組相比，術(shù)后1h、3h、6h，C組胰腺組織NF-κB活性及TNF-α水平明顯降低(P<0.05)；與B組相比，術(shù)后24h及48h，C組胰腺組織HMGB1水平亦顯著

7、降低(P<0.05)。 4.與A組相比，術(shù)后24h，B組胰腺組織病理評分、腹水量及血清AMY水平均顯著增高(P<0.05)；而與B組比較，術(shù)后24h，C組胰腺組織病理評分、腹水量及血清AMY水平均明顯降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1.與TNF-α等早期炎癥因子不同，SAP大鼠胰腺HMGB1表達升高較晚，但持續(xù)時間較長，HMGB1作為一種晚期炎癥因子參與了SAP時胰腺組織的炎癥損傷。 2.抗氧化劑PDTC