整合素表達和MLCK活性對肝癌細胞粘附及遷移特性的影響.pdf

1、肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移特性在體外二維培養(yǎng)中表現(xiàn)為細胞頻發(fā)形變,粘附不穩(wěn)定,遷移速率增快和遷移方向頻繁改變。整合素和MLCK是腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中調(diào)節(jié)細胞粘附穩(wěn)定性和為細胞遷移提供驅(qū)動力的兩個重要分子。從整合素和MLCK對細胞粘附及運動的影響,研究腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移機制有重要的理論意義。目的通過對肝癌細胞整合素受—配體表達不平衡對其粘附特性的影響和MLCK抑制劑ML-7對肝癌細胞增殖和遷移運動的影響,探索肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的過程機制。方法運用細

2、胞形態(tài)學(xué)觀察,圖像分析軟件,微管吸吮和流式細胞儀等手段,分別對肝癌細胞,正常肝細胞整合素表達水平及其配體纖維連接蛋白(Fibronectin,Fn)裱襯后的肝癌細胞的運動變形能力及粘附力進行檢測和定量分析。通過細胞同步化,免疫熒光和免疫組化等實驗技術(shù)對MLCK抑制劑ML-7作用前后肝癌細胞增殖,細胞骨架變化及細胞運動能力進行檢測和定量分析。結(jié)果肝癌細胞的整合素表達量高于正常肝細胞;Fn可下調(diào)整合素的過表達;補充適當(dāng)濃度胞外配體Fn(2.

3、3μg/ml)可使胞外受配體比例恢復(fù)到正常肝細胞的整合素表達水平,肝癌細胞的粘附力增強,細胞運動能力減弱；隨著MLCK抑制劑,ML-7濃度的增加,肝癌細胞增殖受到抑制,細胞由不規(guī)則的多邊形趨向圓形;MLCK表達減弱,并由細胞膜周邊向胞內(nèi)轉(zhuǎn)移;骨架解聚,應(yīng)力纖維松弛,細胞遷移速率降低。結(jié)論胞外配體Fn對肝癌細胞整合素過表達有下調(diào)作用,肝癌細胞的受—配體比例是影響其粘附和運動的因素之一,細胞形變和骨架去裝配與MLCK活性抑制程度相關(guān);低濃度