Angiopoietin-1通過整合素對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞粘附存活和凋亡的影響.pdf

1、目的：探討重組人血管生成素-1(Ang-1)能否通過整合素促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)粘附和存活、抑制其凋亡，并初步討論其抗凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法：密度梯度離心法結(jié)合貼壁分離法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓MSC并通過流式細(xì)胞儀檢查表面抗原做鑒定；在24孔培養(yǎng)板上測(cè)定不同時(shí)間下Ang-1對(duì)MSC的粘附作用；臺(tái)盼藍(lán)染色法和MTT法測(cè)定Ang-1對(duì)血清饑餓下MSC的活力影響；紫杉醇誘導(dǎo)MSC凋亡后，Hoechst染色法和Annexin V/

2、PI法檢測(cè)Ang-1對(duì)MSC凋亡的影響，通過Western blot方法檢測(cè)磷酸化Akt、總Akt、Bcl-2、β-actin表達(dá)水平的變化，結(jié)合整合素抗體和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻滯劑來探討其抗凋亡的可能分子機(jī)制。 結(jié)果：體外成功分離和培養(yǎng)和擴(kuò)增了MSC，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特點(diǎn)和流式細(xì)胞儀表面抗原檢測(cè)均符合MSC特點(diǎn)，其純度達(dá)98.3％。粘附試驗(yàn)顯示在1d、2d、3d三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)Ang-1均能顯著促進(jìn)MSC的粘附(均有P<0.01)，該效

3、應(yīng)能被EDTA、整合素亞單位β1抗體和RGD多肽所抑制(P<0.01)。Ang-1能促進(jìn)血清饑餓下MSC的存活(1d：P<0.01；2d：P<0.005)、增殖(P<0.01)和拮抗紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(P<0.01)，RGD多肽能抑制Ang-1的上述效應(yīng)。Ang-1組pAkt和Bcl-2表達(dá)上調(diào)，RGD多肽能抑制二者的表達(dá)(P<0.01)，PI-3K/Akt通路傳導(dǎo)阻滯劑Wortmannin僅能抑制pAkt的表達(dá)(P<0.01)，對(duì)A