文拉法辛在抑郁癥模型大鼠體內(nèi)生化機(jī)制的代謝物組學(xué)研究.pdf

1、一、目的 應(yīng)用代謝物組學(xué)的方法研究文拉法辛對(duì)抑郁癥模型大鼠內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、NE、DA)代謝變化的影響，從代謝物組的體內(nèi)變化規(guī)律探明抗抑郁藥文拉法辛可能的藥理作用機(jī)制。 二、方法 1.慢性應(yīng)激抑郁模型制備及評(píng)價(jià)用Open-Field法對(duì)60只雄性SD大鼠作行為學(xué)評(píng)定，根據(jù)水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)總得分進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，分為正常對(duì)照組、抑郁模型組、鹽酸文拉法辛高、中、低劑量組和鹽酸氟西汀組共計(jì)6組，每組10只。正

2、常對(duì)照組大鼠每籠5只，不予任何刺激。其他5組采用分養(yǎng)和慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激造成抑郁癥模型大鼠。造模結(jié)束采用Open-Field法和糖水消耗試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 2.給藥方法和生物樣本的采集給予21天刺激后，正常對(duì)照組繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)，每籠飼養(yǎng)5只，其它各組繼續(xù)分養(yǎng)，給予不同的預(yù)處理，即每日分別灌服生理鹽水(2mL，Ⅰ組、Ⅱ組)，低劑量文拉法辛(8 mg·kg-1，Ⅲ組)，中劑量文拉法辛(16 mg·kg-1Ⅳ組)，高劑量文拉法辛(32

3、mg·kg-1，V組)，氟西汀(2 mg·kg-1，Ⅵ)。連續(xù)灌胃14天后，斷頭處死大鼠，在冰臺(tái)上迅速取出全腦置凍存管中，立即投入液氮中冷凍，后放入-80℃冰箱保存待測(cè)。 3.生物樣本的測(cè)定方法3.1 LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定腦組織中5-HT、NE和DA的濃度。 3.2 LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定腦組織中5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA的濃度。 三、結(jié)果 1.生物樣本測(cè)定結(jié)果1.1腦組織中5-

4、HT、NE和DA的濃度測(cè)定5-HT、NE和DA分別在4.45～4450 ng·mL-1、4.11～4110 ng·mL-1和4.10～4100 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好(r≥0.999)，最低檢測(cè)濃度分別為4.45、4.11和4.10ng·mL-1。加樣回收率分別為80.17％～100.02％、70.00％-83.44％和80.12％～86.30％，標(biāo)準(zhǔn)液的日內(nèi)和日間RSD均小于4.66％，勻漿液樣品的日內(nèi)和日間RSD均小于6.

5、30％。 1.2腦組織中5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA的濃度測(cè)定5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA在12.5～1000 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好(r≥0.998)，最低檢測(cè)濃度為12.5 ng·mL-1。加樣回收率分別為90.98％～95.71％、93.93％～106.81％、95.13％～108.36％和86.62％～97.42％，標(biāo)準(zhǔn)液的日內(nèi)和日間RSD均小于8.45％，勻漿液樣品的日內(nèi)和日間RS

6、D均小于8.33％。 2.文拉法辛對(duì)大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響服藥后與模型組(Ⅱ組)相比，文拉法辛低劑量組(Ⅲ組)神經(jīng)遞質(zhì)含量及比值無(wú)顯著性差異。文拉法辛中劑量組(Ⅳ組)5-HT與NE的含量顯著升高(P<0.01)，5.HIAA的含量明顯下降(P<0.05)；DA的含量升高，MHPG、DOPAC和HVA的含量下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；5-HIAA/5-HT與MHPG/NE顯著降低(P<0.01)；(DOPAC+HVA)/DA與NE/5-

7、HT有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。文拉法辛高劑量組(V組)5-HT與5-HIAA的含量均明顯升高(P<0.05)；NE的含量升高，DA、MHPG、DOPAC和HVA的含量下降，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；MHPG/NE顯著降低(P<0.01)；5-HIAA/5-HT與NE/5-HT有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。氟西汀組(Ⅵ組)除5-HIAA/5-HT顯著降低(P<0.01)外，其他神經(jīng)遞質(zhì)含量和比值均無(wú)顯著性差異。 四、結(jié)論 1.抑郁