黃瓜花葉病毒運動蛋白與微絲作用關(guān)系及胞間連絲通透性調(diào)節(jié)機制的研究.pdf

1、本文探討了黃瓜花葉病毒運動蛋白(CMVMP)與微絲的作用關(guān)系及通過作用于微絲對胞間連絲的調(diào)控機制。　　本文利用大腸桿菌體外表達(dá)黃瓜花葉病毒運動蛋白，從包含體中提純并獲得了有一定活性的CMVMP，同時純化了兔骨骼肌肌動蛋白；利用免疫印跡，共沉淀和熒光觀察，證明了CMVMP與肌動蛋白及微絲的結(jié)合活性。同時證明它在微絲聚合溶液中能夠形成二聚體和聚集體，這種二聚體的形成可能與ATP有關(guān)。運用共沉淀結(jié)合熒光光度法，電鏡，光鏡觀察證明CMVMP對

2、肌動蛋白聚合過程的影響與CMVMP濃度有關(guān)，低濃度CMVMP降低Actin聚合臨界濃度，促進(jìn)聚合；高濃度CMVMP提高Actin聚合的臨界濃度，抑制聚合。直接的觀察結(jié)果顯示低濃度CMVMP作用下，呈現(xiàn)的微絲有許多短片段出現(xiàn)，高濃度CMVMP作用下，呈現(xiàn)的微絲基本上呈點狀，說明CMVMP不影響Actin成核甚至有助于成核，但抑制微絲的延伸。進(jìn)一步的觀察證明CMVMP對微絲的作用主要是切割作用。這種作用同樣與CMVMP作用濃度有關(guān)，低濃度C

3、MVMP對微絲的作用不明顯而高濃度CMVMP對微絲有明顯的切割作用。隨著CMVMP反應(yīng)濃度的增加，在熒光顯微鏡和電鏡下看到的微絲越來越短，在溶液中CMVMP與Actin摩爾比達(dá)到1：1以上時微絲均為很小的片斷而呈點狀結(jié)構(gòu)，觀察不到較長的微絲片斷；而熒光光度法測定的結(jié)果表明，隨CMVMP濃度增加而熒光曲線只是稍有下降，說明微絲的總量并未發(fā)生明顯的變化，因此我們推證看到的短微絲片段主要是由CMVMP的切割效應(yīng)造成的。CMVMP對微絲的破壞作