抗CEA單抗導(dǎo)向的β-葡萄糖苷酶-苦杏仁甙前藥系統(tǒng)治療大腸癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文抗CEA單抗導(dǎo)向的β葡萄糖苷酶苦杏仁甙前藥系統(tǒng)治療大腸癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：連彥軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普通外科）指導(dǎo)教師：陳道達(dá)黃韜20050501華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博十學(xué)位論文腫瘤細(xì)胞上的酶會(huì)特異性地將前藥轉(zhuǎn)化為活性藥物。該方法不僅解決了化療藥物的靶向性問題，同時(shí)，由于由于酶的放大效應(yīng)，少量酶可激活大量的前藥，該方法也解決了單純將藥物與抗體結(jié)合所致載藥量不足的問題，是一種前景廣闊的腫瘤療法?？嘈尤蔬?/p>

2、是從薔薇科植物的種子中提取的一種天然成分，它在B一葡萄糖苷酶的特異性激活作用下可分解產(chǎn)生劇毒的氫氰酸，氫氰酸能與細(xì)胞線粒體內(nèi)細(xì)胞色素氧化酶的三價(jià)鐵反應(yīng)，抑制該酶的活性從而引起細(xì)胞呼吸抑制，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。業(yè)已證明，定濃度的氰化物能誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞PCI2及白血病細(xì)胞HL60凋亡。根據(jù)苦杏仁甙的這一特性，能否將其作為大腸癌ADEPT的前體藥物，為大腸癌的治療開辟一條新的途徑呢為此，本課題以抗CEA單抗為導(dǎo)向載體、苦杏仁甙為前藥、B葡萄糖苷酶為專

3、一性前藥活化酶組成ADEPT系統(tǒng)，并從細(xì)胞水平、動(dòng)物整體水平對(duì)該系統(tǒng)對(duì)人大腸癌的治療作用進(jìn)行了闡述。首先，我們分別將不同濃度的苦杏仁甙單獨(dú)或聯(lián)合13葡萄糖苷酶作用于LoVo細(xì)胞以觀察對(duì)細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果表明，單純苦杏仁甙對(duì)LoVo細(xì)胞毒性很低，而被B葡萄糖營(yíng)酶激活后，細(xì)胞毒性明顯增加，是單用苦杏仁甙的38倍，與相同濃度的氰化鉀相似，在實(shí)驗(yàn)劑量下，LoVo細(xì)胞呈現(xiàn)出凋亡的各種改變；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，上述處理導(dǎo)致LoVo細(xì)胞凋亡的機(jī)制，可能

4、與Bax基因表達(dá)上調(diào)以及Caspase3活化作用有關(guān)。其次，我們通過異型雙功能交聯(lián)劑Ⅳ羥基琥珀酰亞胺間(M馬來酰亞胺基)苯甲酸酯(MBS)將抗CEA單克隆抗體與B葡萄糖苷進(jìn)行化學(xué)連接，制備出抗CEA單抗13葡萄糖苷酶偶聯(lián)物，在實(shí)驗(yàn)條件下，偶聯(lián)物中抗體與酶的結(jié)合比為1：1，ELISA方法檢測(cè)證實(shí)偶聯(lián)物有效地保持了抗體的免疫反應(yīng)性與酶活性；再次經(jīng)體外細(xì)胞毒作用研究顯示，被B葡萄糖苷酶或含等量酶的抗CEA單抗一13葡萄糖苷酶偶聯(lián)物激活后，苦杏