超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分 超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注過程中的損傷作用 目的：探討超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注過程中的損傷作用。 方法：用Wistar大鼠腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素，建立超負(fù)荷糖尿病大鼠模型后用線栓法做大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組(A)、超負(fù)荷血糖組(B)、非超負(fù)荷血糖對(duì)照組(C)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，用TTC染色法測(cè)量腦梗死體積，用干濕重法計(jì)算腦的含水量，應(yīng)用原位末端標(biāo)記(TUNEL)

2、觀察腦缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元凋亡的變化。 結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)神經(jīng)元的凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的漸進(jìn)過程。超負(fù)荷血糖在大鼠腦缺血再灌注過程中有明顯的損傷作用。 第二部分 超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注后CytCmRNA和Caspase-3mRNA表達(dá)的影響 目的：探討超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后CytCmRNA和Caspase-3mRNA表達(dá)的影響。 方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)

3、脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組(A)、超負(fù)荷血糖組(B)、非超負(fù)荷血糖對(duì)照組(C)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，用TTC染色法測(cè)量各層面腦梗死面積的百分比，應(yīng)用原位雜交技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：腦缺血再灌注后，缺血周圍區(qū)的神經(jīng)元內(nèi)CytCmRNA和Caspase-3mRNA均高表達(dá)，二者在局灶性腦缺血再灌注損傷中起重要作用。超負(fù)荷血糖明顯加重了大鼠腦缺血再

4、灌注損傷，超負(fù)荷血糖可能通過增加CytCmRNA和Caspase-3mRNA的表達(dá)這一途徑來加重腦缺血再灌注損傷。 第三部分 超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后bcl-2和bax表達(dá)的影響 目的:探討超負(fù)荷血糖對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2表達(dá)的影響。 方法:用Wistar大鼠腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素，建立超負(fù)荷糖尿病大鼠模型后做左大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注模型。然后對(duì)大鼠進(jìn)行腦

5、梗死體積計(jì)算并且采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)超負(fù)荷血糖大鼠和正常大鼠腦缺血3h再灌注24小時(shí)bax、bcl-2的表達(dá)，同時(shí)采用TUNEL法原位標(biāo)記DNA片段，檢測(cè)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞的變化，并與假手術(shù)正常對(duì)照組比較。 結(jié)論:超負(fù)荷血糖加重了大鼠腦缺血再灌注損傷，超負(fù)荷血糖誘發(fā)的bax、bcl-2的表達(dá)異常促進(jìn)了腦細(xì)胞的凋亡，可能是其加重腦缺血再灌注損傷的機(jī)制之 第四部分 超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注后MMP-2和MMP

6、-9表達(dá)的影響 目的：探討超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響。 方法：用線栓法制作大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組、超負(fù)荷血糖組、非超負(fù)荷血糖組進(jìn)行腦含水量及EB含量的測(cè)定，用免疫組化技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)MMP-2和MMP-9的表達(dá)。 結(jié)論：腦缺血再灌注后，病變區(qū)MMP-2和MMP-9表達(dá)增加，二者與腦缺血再灌注后腦水腫有關(guān)。超負(fù)荷血糖

7、可能通過增加MMP-2和MMP-9的表達(dá)這一途徑來加重大鼠腦水腫，對(duì)腦缺血再灌注損傷起重要作用作用。 第五部分 超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠腦缺血再灌注后uPA及uPAR表達(dá)的影響 目的：探討超負(fù)荷血糖對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后uPA及uPAR表達(dá)的影響。方法：用線栓法制做大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型(MCAO)，分別對(duì)假手術(shù)組、超負(fù)荷血糖組、非超負(fù)荷血糖組進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，用TTC染色法測(cè)量腦梗塞體積，采用免疫組織

8、化學(xué)和RT-PCR的方法檢測(cè)超負(fù)荷血糖大鼠和正常大鼠腦缺血3h再灌注24小時(shí)uPA(尿激酶型纖溶酶原激活物)、uPAR(尿激酶型纖溶酶原激活物受體)的表達(dá)，并與假手術(shù)組比較。結(jié)果：超負(fù)荷血糖組大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分明顯高于非超負(fù)荷血糖組，超負(fù)荷血糖組梗死面積明顯大于非超負(fù)荷血糖組；同時(shí)，超負(fù)荷血糖組uPA、uPAR的表達(dá)明顯高于非超負(fù)荷血糖組。結(jié)論超負(fù)荷血糖加重了大鼠腦缺血再灌注損傷，超負(fù)荷血糖誘發(fā)的uPA、uPAR的表達(dá)增高可能是其加重