DkMYB和DkbHLH介入柿果實(shí)采后脫澀轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、柿（Diospyros kaki）原產(chǎn)于我國(guó)，現(xiàn)栽培品種以澀柿為主，其果實(shí)需經(jīng)過(guò)采后脫澀才能食用，因此采后脫澀一直是柿生產(chǎn)與研究的重要主題。本論文以‘磨盤柿’為試材，利用高濃度CO2(95％)處理以加速柿果實(shí)采后脫澀，檢測(cè)了脫澀過(guò)程中的相關(guān)生理指標(biāo)，克隆分離了DkMYB和DkbHLH轉(zhuǎn)錄因子，利用基因表達(dá)、染色體步移、雙熒光素酶等技術(shù)/體系，鑒別了介入柿果實(shí)采后脫澀的關(guān)鍵DkMYB轉(zhuǎn)錄因子，并初步明確了其作用靶標(biāo)，該結(jié)果進(jìn)一步豐富了柿果

2、實(shí)脫澀轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機(jī)制。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴高濃度CO2處理(95％)的脫澀效應(yīng)分析。研究發(fā)現(xiàn)高濃度CO2處理可快速降低‘磨盤柿’果實(shí)可溶性單寧含量，促使果實(shí)采后脫澀。伴隨脫澀過(guò)程，‘磨盤柿’果實(shí)的不溶性單寧、乙醇、乙醛等快速上升，因此，本研究從生理水平進(jìn)一步明確了高濃度CO2的脫澀效應(yīng)，并推測(cè)其通過(guò)誘導(dǎo)乙醛代謝，進(jìn)而促使果實(shí)的可溶性單寧向不溶性單寧轉(zhuǎn)變。⑵柿果實(shí)DkMYB和DkbHLH克隆與表達(dá)分析。利用RNA-seq和R

3、ACE技術(shù)分離到4個(gè)DkMYB和2個(gè)DkbHLH成員，并分別命名為DkMYB5-8和DkbHLH1-2。通過(guò)序列比對(duì)和進(jìn)化樹聚類，明確了DkMYB和DkbHLH分別具有典型的MYB和bHLH結(jié)構(gòu)域?；虮磉_(dá)結(jié)果分析表明，除DkbHLH2外，其他5個(gè)成員均在CO2脫澀處理過(guò)程中受顯著誘導(dǎo)，表現(xiàn)為與脫澀進(jìn)程顯著正相關(guān)關(guān)系。⑶介入柿果實(shí)脫澀轉(zhuǎn)錄調(diào)控的DkMYB6的鑒別及作用途徑分析。利用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)6個(gè)轉(zhuǎn)錄因子中，僅DkMYB6可顯著

4、增強(qiáng)脫澀關(guān)鍵靶標(biāo)基因DkPDC2和DkPDC3的啟動(dòng)子活性。進(jìn)一步研究明確了，DkMYB6可誘導(dǎo)脫澀相關(guān)的DkERF基因（DkERF9、DkERF19和DkERF22）的啟動(dòng)子活性，但DkMYB6與上述DkERF間無(wú)顯著協(xié)同增效效應(yīng)。該結(jié)果表明，DkMYB6參與了柿果實(shí)采后脫澀的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，不僅可激活脫澀相關(guān)靶標(biāo)基因（DkPDC2和DkPDC3），還可調(diào)控前期鑒別的脫澀相關(guān)DkERF轉(zhuǎn)錄因子。該結(jié)果進(jìn)一步豐富了柿果實(shí)采后脫澀的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制