STI571聯(lián)合As-,2-S-,2-或甲異靛對(duì)K562細(xì)胞的作用研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文SSTI571聯(lián)合AsS或甲異靛對(duì)K562細(xì)胞的作用研究姓名：吳英理申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）指導(dǎo)教師：孫關(guān)林2003.5.1上海第二醫(yī)科大學(xué)博士論文STl571可下調(diào)磷酸化RB，磷酸化STAT5，cmyc，兩者合用后上述信號(hào)分子下調(diào)更明顯。表明兩者可能通過(guò)協(xié)同降低BCR／ABL的PTK活性，減少BCR／ABL下游信號(hào)分子含量或降低其活性，阻止BCR／ABL信號(hào)向下游傳導(dǎo)，促使K562細(xì)胞凋亡

2、。對(duì)線粒體跨膜電位，caspase3活性的檢測(cè)顯示，線粒體跨膜電位下降，caspase3活化，參與了STl571，As2S2誘導(dǎo)的K562細(xì)胞凋亡。2細(xì)胞分化。STl571可誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化呈時(shí)量依賴性，表現(xiàn)為血紅蛋白合成增加，聯(lián)苯胺陽(yáng)性率增加，血型糖蛋白A(GlycophorinA)表達(dá)升高，Westernblot結(jié)果顯示，STl571作用后24小時(shí)，Erk2活性明顯升高，而加用MAPK／Erk2信號(hào)傳導(dǎo)阻滯劑U0126可以

3、明顯減弱STl571的促紅系分化作用，提示MAPK／Erk2信號(hào)傳導(dǎo)途徑在STl571誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化過(guò)程中起重要作用。As2s2不能誘使K562細(xì)胞向紅系分化，和STl571聯(lián)用后聯(lián)苯胺陽(yáng)性率下降，血型糖蛋白A表達(dá)下降。其機(jī)制可能與As2S2使細(xì)胞阻滯于G2／M期有關(guān)，(見(jiàn)后)。隨著STl571濃度增加，K562細(xì)胞聯(lián)苯胺陽(yáng)性率升高，但細(xì)胞凋亡率也增加，為探討紅系分化過(guò)程中細(xì)胞凋亡與分化之間是否存在某種關(guān)聯(lián)，本文用Caspa

4、se抑制劑zVADFMK和STl571聯(lián)合應(yīng)用，結(jié)果caspase3活性明顯下降，但聯(lián)苯胺陽(yáng)性率未見(jiàn)明顯降低，提示STl571誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和分化之間無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。3細(xì)胞周期。As2S2可使K562細(xì)胞阻滯于G2／M期。這由于As2S2通過(guò)降低cdc25c水平，減少CDKl活化，使細(xì)胞無(wú)法由G2期進(jìn)入有絲分裂：通過(guò)阻止cyclinB降解，使細(xì)胞無(wú)法最終完成有絲分裂，導(dǎo)致K562細(xì)胞發(fā)生G2／M期阻滯。STl571可使K562細(xì)胞阻滯于G1

5、期。這由于STl571通過(guò)上調(diào)P27水平，減少Rb磷酸化促使細(xì)胞發(fā)生Gl期阻滯。3肛MAs2s2與O3肛MSTl571聯(lián)合作用后8—16小時(shí)，K562細(xì)胞阻滯在G2／M期，隨后G2／M期細(xì)胞比例下降，但sub—G1細(xì)胞增多。有研究報(bào)告顯示，G2／M期細(xì)胞對(duì)凋亡刺激的敏感性增加。本文對(duì)此進(jìn)行了研究。先以As2s2或微管抑制劑Nocodazole處理12小時(shí)使K562細(xì)胞阻滯于GUM期，再以STl571處理24小時(shí)細(xì)胞凋亡率要高于先以STl