枸杞多糖防治大鼠酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著飲酒人數(shù)及人均酒精消費(fèi)量的增多，酒精對(duì)人體肝臟的損害日益成為一個(gè)全球性的問題。酒精性脂肪肝是最早、最常見的慢性肝損害之一，因其可逐漸發(fā)展為肝纖維化、肝硬化而危害極大。目前，酒精性肝損傷發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，國(guó)內(nèi)外亦無(wú)防治的理想藥物，因此，從分子生物學(xué)角度研究其發(fā)病機(jī)制，尋找安全有效的中藥防治AFL成為一重要課題。 乙醇通過誘導(dǎo)細(xì)胞色素P4502E1(CytochromeP4502E1，CYP2E1)表達(dá)及調(diào)控使反應(yīng)性氧(re

2、active oxygen species，ROS)增多，進(jìn)一步通過激活氧應(yīng)激、增強(qiáng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)致肝損傷。枸杞多糖(LyciumBarbarum Polysaccharide，LBP)是寧夏枸杞的重要抗氧化成分，有報(bào)道在動(dòng)物體內(nèi)可清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞。但對(duì)其防治酒精性肝損傷的分子機(jī)制研究尚不夠深入，且缺乏在酒精持續(xù)作用下能否保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷的研究。 目的 1．建立慢性酒精性脂肪肝(AFL)大鼠

3、模型。 2．探討乙醇導(dǎo)致AFL的機(jī)制。 3．探討枸杞多糖(LBP)對(duì)AFL的防治效果。 4．研究LBP防治AFL的機(jī)制。 方法 1．用乙醇濃度遞增，每日分兩次灌胃10周建立大鼠慢性AFL模型。 2．取大鼠肝組織作病理切片，HE及蘇丹Ⅲ染色，行病理學(xué)觀察。 3．取大鼠血清測(cè)定肝功能酶譜：ALT、AST、γ-GT。 4．取大鼠肝組織制備肝勻漿，考馬斯亮藍(lán)測(cè)定勻漿蛋白含量，試劑盒

4、測(cè)定肝組織中脂質(zhì)過氧化酶(GSH-PX、SOD活力，MDA、GSH)及H<,2>O<,2>含量。 5．采用免疫組織化學(xué)染色法、RT-PCR法、Western Blot法測(cè)定大鼠肝組織中CYP2E1基因及蛋白表達(dá)。 6．采用超高速冷凍離心機(jī)提取大鼠肝微粒體，用Nash法測(cè)定CYP3A活性，RT-PCR法測(cè)定CYP3A基因表達(dá)。 結(jié)果與結(jié)論 1．Wistar大鼠用40％(V/V)乙醇8g/Kg.d灌胃至5周末

5、，增加至50％(V/V)9g/Kg.d灌胃至10周末，可成功制備慢性AFL大鼠模型，且死亡率較低(約13％-17％)，穩(wěn)定性較好。 2．乙醇能明顯升高ALT、AST、γ-GT，并通過誘導(dǎo)CYP2E1基因及蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)CYP3A活性及基因表達(dá)，增強(qiáng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低GSH-PX、SOD活力和GSH含量，增加MDA、H2O2含量，損害肝細(xì)胞，導(dǎo)致肝臟脂肪變性。 3．LBP通過抑制CYP2E1及CYP3A表達(dá)，減輕脂質(zhì)過氧