IGF-1及相關蛋白在病毒性心肌炎的表達和黃芪甲甙的干預研究.pdf

1、第一部分 目的:觀察病毒性心肌炎小鼠不同時點血漿、心肌組織中IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3 等相關蛋白的表達，探討其在病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展中的可能作用。 方法:取4 周齡雄性Balb/c小鼠60 只，隨機分為空白對照組（20 只）和病毒實驗組（40 只）。病毒實驗組于實驗當日一次腹腔注射0.1ml含1×102TCID50CVB3(Nancy株)病毒液，空白對照組腹腔注射0.1ml不含病毒的Eagle’s細胞培

2、養(yǎng)液。分別于實驗第3d、7d、15d、30d隨機處死部分小鼠，用ELISA法測血漿IGF-1的表達，心肌病理切片HE染色，免疫組化法和RT-PCR技術檢測心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 等相關蛋白的表達。 結果: （1）病毒性心肌炎小鼠血漿IGF-1 檢測均值為（565.75±63.2）pg/ml,空白對照組為（365.92±37.31）pg/ml，病毒實驗組較空白對照組高，差異有顯著性。 （2

3、）小鼠在感染CVB3病毒后血漿IGF-1 表達逐漸增高，15d達最高峰，30d表達降低但仍維持在一較高水平，在各時點實驗組與對照組IGF-1 值比較，差異均有顯著性。 （3）心肌組織免疫組化染色示在正常心肌組織有IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 等相關蛋白的低表達，小鼠感染CVB3病毒后IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 等相關蛋白表達增高，以15d時最明顯，其灰度值比較有統(tǒng)計學意義。RT-PCR方法檢測心肌組織IGF

4、-1 及IGFBP3 mRNA表達在病毒實驗組亦高于空白對照組。 結論:IGF-1—IGF-1R—IGFBPs 軸可能在病毒性心肌炎發(fā)病機制中有重要作用。 第二部分 目的:觀察黃芪甲甙對急性小鼠病毒性心肌炎干預后，IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3等相關蛋白的表達變化，探索黃芪甲甙的治療機制。 方法:4周齡雄性Balb/c小鼠65 只，隨機分為A、B、C、D、E五組。A組為正?？瞻讓φ战M10 只，實

5、驗當日僅腹腔接種0.1ml不含病毒的Eagle’s細胞培養(yǎng)液，每天以配制黃芪甲甙的羥甲基纖維素鈉溶液灌胃1 次，連續(xù)2周；B組為正常黃芪對照組10只，實驗當日腹腔接種Eagle’s細胞培養(yǎng)液，每天以9％黃芪甲甙液灌胃1次，連續(xù)2周；C組為黃芪高劑量治療組15只，實驗當日腹腔接種0.1ml內含1×102TCID50CVB3病毒，每天以9％黃芪甲甙液灌胃1次，連續(xù)2周；D組為黃芪低劑量治療組15 只，實驗當日腹腔接種0.1ml內含1×102

6、TCID50CVB3病毒，每天以1％黃芪甲甙液灌胃1次，連續(xù)2周；E組為病毒對照組15 只，實驗當日腹腔接種CVB3病毒，每天以羥甲基纖維素鈉液灌胃1次，連續(xù)2 周。觀察各組小鼠死亡率，第15 天常規(guī)無菌采血、取心臟，用ELISA法測血漿IGF-1的表達，并作心肌病理切片HE染色，觀察心肌病理學改變；免疫組化技術和RT-PCR技術檢測心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 的表達。 結果: （1）C組死亡率較D

7、、E組明顯降低，B組無小鼠死亡。 （2）C組心肌病變積分比D、E組明顯下降，病變程度明顯輕于D、E組，D組和E 組間病變積分及程度無顯著差異。 （3）ELISA法檢測血漿IGF-1 均值A 組為365.92 pg/ml, B組為372.23pg/ml, C組為472.46 pg/ml, D組為654.51 pg/ml, E組為648.75pg/ml，與A組比較，C組均值增高，D、E組明顯增高，差異均有統(tǒng)計學意義，B組無顯

8、著差異，D組與E組間亦無顯著差異。 （4）心肌組織免疫組織化學染色及RT-PCR 檢測在蛋白水平和mRNA 水平均提示，正常心肌組織中有IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3低表達，在C 組表達稍增高，在D、E組表達顯著增高，而B組無明顯變化，D、E 組間表達無明顯差異。 結論:黃芪甲甙干預可降低小鼠IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3等相關蛋白的表達，推測黃芪甲甙對急性病毒性心肌炎小鼠心肌組織的保護作用可能是通過