多發(fā)性硬化患者髓鞘堿性蛋白及其抗體與寡克隆區(qū)帶的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景 多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis，MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System，CNS)炎癥性脫髓鞘性自身免疫性疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但其自身免疫的發(fā)病機(jī)制已得到證實(shí)和公認(rèn)，屬于特異性抗原介導(dǎo)的細(xì)胞免疫和體液免疫共同參與的炎性脫髓鞘疾病。目前尚無(wú)證據(jù)說(shuō)明何種抗原在MS的病因中最為重要，但有力證據(jù)表明髓鞘堿性蛋白(Myelin Basic Protein，MBP)比較關(guān)

2、鍵，MS患者由于免疫功能的異常，使MBP具有自身抗原性，引起T淋巴細(xì)胞致敏活化和B細(xì)胞克隆擴(kuò)增、表達(dá)效應(yīng)功能，產(chǎn)生了MBP抗體(Myelin Basic Protein Antibody，MBPA)，這些抗體在T細(xì)胞參與下，作用于MBP和其它完整的髓鞘磷脂蛋白，故認(rèn)為MBP及MBPA在MS的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)健作用。 MBP是構(gòu)成髓鞘的主要成分之一，具有神經(jīng)組織特異性。當(dāng)神經(jīng)組織受損時(shí)，游離MBP進(jìn)入腦脊液(Cerebrospina

3、l Fluid，CSF)或(和)血液，導(dǎo)致體液MBP含量增高并可能刺激機(jī)體產(chǎn)生MBPA自身抗體。國(guó)內(nèi)外學(xué)者曾對(duì)急性腦外傷、腦血管疾病、多發(fā)性硬化、腦炎和腦膜炎等患者CSF和血清MBP含量進(jìn)行研究，一致認(rèn)為CSF和血清MBP是在一定程度上反映了CNS有無(wú)實(shí)質(zhì)性損害，特別是有無(wú)髓鞘脫失的一個(gè)較為特異性的生化指標(biāo)，對(duì)判斷病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有重要意義。寡克隆區(qū)帶(Oligoclonal Band，OCB)是CNS內(nèi)存在抗原的一種特異反應(yīng)，說(shuō)明患

4、者CNS內(nèi)合成的免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)發(fā)生了質(zhì)的變化，提示發(fā)病機(jī)制包括免疫功能異常，是檢測(cè)CNS亞急性、慢性炎性病變鞘內(nèi)免疫球蛋白合成的最可靠指標(biāo)，具有較高的敏感性和良好的特異性。多年來(lái)一直被推薦用于診斷MS，尤其是僅憑臨床表現(xiàn)無(wú)法確定診斷時(shí)；同時(shí)0CB對(duì)MS有預(yù)測(cè)作用。 關(guān)于MS OCB所針對(duì)的抗原至今尚不明確，有人發(fā)現(xiàn)32﹪的MS患者腦脊液中有寡克隆抗MBP-IgG抗體帶，提示OCB可能與MBP、M

5、BPA有一定的相關(guān)性。 研究目的： 1、分析OCB與MBP及MBPA含量的關(guān)系2、比較傳統(tǒng)型MS和視神經(jīng)脊髓炎(Neuromyelitis Optica，NMO)患者血清和CSF MBP及MBPA的含量3、比較急性發(fā)作期和緩解期MS患者血清和CSF MBP及MBPA的含量4、比較不INMS類型OCB的陽(yáng)性率及意義1、病例資料及標(biāo)本收集材料與方法收集40例MS患者的CSF及血清配對(duì)標(biāo)本，CSF 2ml，靜脈血5ml，離心，

6、分裝置-20℃冰箱保存。 2、實(shí)驗(yàn)方法與步驟 2．1、散射比濁法測(cè)定CSF/血清IgG、Alb含量 2．2、等電聚焦電泳(Isoelectric Focusing Electrophoresis，IEF)檢測(cè)CSF和血清中的OCB 2．3、雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法檢測(cè)CSF/血清的MBP 2．4、間接ELISA法檢測(cè)

7、CSF/血清的MBPA 結(jié)果： 1、MS、傳統(tǒng)型MS與NMO OCB陽(yáng)性率均無(wú)明顯差異。 2、OCB陽(yáng)性和OCB陰性的MS患者血腦屏障(Blood-Brain Barrier，BBB)破壞指數(shù)、IgG指數(shù)升高和IgG合成率(IgG Syn)升高無(wú)明顯差異。 3、傳統(tǒng)型MS和NMO的BBB破壞指數(shù)、IgG指數(shù)升高和IgG Syn升高無(wú)明顯差異。 4、MS患者CSF MBP含量高于血清MBP，兩者呈正

8、相關(guān)。 5、MS患者CSF MBPA含量高于血清MBPA，兩者呈正相關(guān)。 6、OCB陽(yáng)性MS患者的血清MBP、腦脊液MBP、血清MBPA和腦脊液MBPA的含量均高于OCB陰性患者。 7、急性發(fā)作期MS患者的血清MBP、CSF MBP、血清MBPA、CSF MBPA的含量均高于緩解期患者。 8、傳統(tǒng)型MS患者的血清MBP、CSF MBP、血清MBPA、CSF MBPA的含量與NMO無(wú)明顯差別。 9、

9、血清MBP、CSF MBP、血清MBPA、CSF MBPA與擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分(Expanded Disability Status Scale，EDS S)無(wú)明顯相關(guān)性。 10、CSF MBP與疾病病程呈正相關(guān)、血清MBP、血清MBPA、CSF MBPA與疾病病程無(wú)明顯相關(guān)性。 11、血清MBP、CSF MBP、血清MBPA、CSF MBPA與BBB破壞指數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性。 結(jié)論： 1、 MS患者存在免疫介

10、導(dǎo)的脫髓鞘改變，同時(shí)也出現(xiàn)了BBB通透性的改變和MBP釋出。 2、 MBP、MBPA與OCB有相關(guān)性：MBP可能是產(chǎn)生OCB的一種抗原，MBPA可能是OCB的一個(gè)組分。 3、 MS患者急性期存在明顯脫髓鞘，血清/CSF MBP、MBPA的含量可作為MS病變活動(dòng)的指標(biāo)。 4、與傳統(tǒng)型MS類似，血清/CSF的MBP和MBPA也參與NMO的脫髓鞘機(jī)制。 5、我國(guó)傳統(tǒng)型MS患者OCB陽(yáng)性率較低，可能原因之一是NM